磁性納米四氧化三鐵顆粒及漢黃芩素逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：本課題旨在觀察磁性納米四氧化三鐵(Magnetic Nanoparticle of Fe3O4，MNPs-Fe3O4，MNPs)、漢黃芩素(wogonin，Wog)以及柔紅霉素(Daunorubicin，DNR)三者共聚合對(duì)K562/A02細(xì)胞多藥耐藥(Multidrug resistance，MDR)的影響及作用機(jī)制，為體內(nèi)和臨床試驗(yàn)提供重要的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：(1)應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法分析DNR、

2、MNPs，Wog、DNR聯(lián)合Wog、MNPs共聚合DNR，MNPs共聚合DNR和Wog分別作用于K562/A02細(xì)胞24h、48h及72h之后的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況；(2)采用透射電鏡(Transmission Electron Microscope，TEM)和普魯士藍(lán)染色法(Prussian blue staining)觀察MNPs在細(xì)胞內(nèi)的位置分布及形態(tài)特征；(3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)不同分組藥物作

3、用48h后K562/A02細(xì)胞的凋亡率及細(xì)胞內(nèi)柔紅霉素濃度；(4)采用RT-PCR法檢測(cè)K562/A02細(xì)胞及各用藥組作用48h后基因mdr1的mRNA表達(dá)水平；(5)采用Western blot法檢測(cè)K562/A02細(xì)胞及各用藥組細(xì)胞P-gp表達(dá)水平。
　　結(jié)果：(1)MTT結(jié)果示作用K562/A02細(xì)胞株48h后，Wog在0-40μmol/L，MNPs在0-0.4(v：v)均無(wú)明顯的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用(生長(zhǎng)抑制率<10％)，同時(shí)

4、，DNR，DNR+Wog，DNR-MNPs及DNR-Wog-MNPs共聚物組對(duì)K562/02細(xì)胞均表現(xiàn)生長(zhǎng)抑制作用，呈時(shí)間依賴性和濃度依賴性。DNR，DNR+Wog，DNR-MNPs及DNR-Wog-MNPs共聚物組48h的DNR IC50值分別為34.84±3.11μmol/L、7.19±0.65mμmol/L、8.94±0.82μmol/L、3.93±0.33μmol/L；(2)透射電鏡結(jié)果顯示0.1(v：v)的MNPs作用細(xì)胞后存

5、在于吞飲小泡中，對(duì)細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯影響，單個(gè)MNP電鏡下測(cè)得直徑為16.72±1.37nm，普魯士藍(lán)染色顯示0.1(v：v)的MNPs作用K562/A02細(xì)胞48小時(shí)后，100％的細(xì)胞中有呈藍(lán)染顆粒納米粒子團(tuán)；(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各用藥組48h凋亡率結(jié)果示2μmol/L DNR和20μmol/L Wog及0.1(v：v)MNPs與對(duì)照組間無(wú)明顯差別(P>0.05)，DNR+Wog，2μmol/LDNR-MNPs及2μmol/L DNR-W

6、og-MNPs共聚物凋亡率較其他組明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且DNR-Wog-MNPs共聚物組凋亡率較其余各組均明顯升高(P<0.05)；(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各用藥組48h后，DNR+Wog、DNR-MNPs及DNR-Wog一MNPs兩組K562/A02細(xì)胞內(nèi)柔紅霉素濃度較DNR單藥組明顯升高(P<0.05)，DNR-Wog-MNPs較DNR+Wog組柔紅霉素?zé)晒獗戎蹈?P<0.05)；(4)RT-PCR法檢測(cè)K562

7、/A02細(xì)胞及各用藥組作用48h后mdr1 mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果示，較空白對(duì)照組Wog組的下調(diào)率為44.85％±3.89％，DNR+Wog組為59.13％±3.48％，DNR-Wog-MNPs組為75.80％±4.32％(P<0.05)；(5)Westernblot法檢測(cè)K562/A02細(xì)胞及各用藥組作用48h后，較空白對(duì)照組P-gp在Wog組的蛋白表達(dá)抑制率為40.62％±2.57％，DNR+Wog組為69.93％±4.63％，D

8、NR-Wog-MNPs組為79.51％+4.48％(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1)MNPs以胞吞作用進(jìn)入K562/A02細(xì)胞，48小時(shí)100％的細(xì)胞內(nèi)均可見(jiàn)藍(lán)染的鐵粒子；
　　2)DNR-Wog-MNPs作用于K562/A02細(xì)胞可發(fā)揮顯著的細(xì)胞毒作用，其IC50值較其他組(DNR、DNR+Wog、DNR-MNPs)明顯降低；
　　3)DNR-Wog-MNPs顯著誘導(dǎo)K562/A02細(xì)胞凋亡，凋亡率較其他