四種中藥對K562-A02細(xì)胞經(jīng)典及非經(jīng)典多藥耐藥途徑作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、通過研究中藥復(fù)方當(dāng)歸注射液(Angelicasinensis(Oliv)Diels compound injection)、麻黃堿(Ephedrine)、馬錢子堿(Vauqueline)、士的寧(Strychnine)對人白血病多藥耐藥細(xì)胞株K562/A02 MDRl(multidrug resistance 1)、MRP(multidrugresistance-associated protein)、Topo Ⅱ(topoisomer

2、aseⅡ)、GST-π(glutathiones-transferase)基因及其蛋白表達(dá)的影響，探討上述四種中藥對K562/AO2細(xì)胞多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)途徑。 研究對象： 人白血病耐藥細(xì)胞株：K562/AO2細(xì)胞方法： 采用臺盼藍(lán)拒染法檢測復(fù)方當(dāng)歸注射液的細(xì)胞毒作用及噻唑藍(lán)(MTT)法檢測麻黃堿、馬錢子堿、士的寧的細(xì)胞毒作用；采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫印跡(Westem Blot)分別檢測上

3、述四種中藥在非細(xì)胞毒濃度(ICxo)作用下對K562/A02細(xì)胞MDRl、MRP、TopoH、GST-πmRNA及其蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：1、非細(xì)胞毒濃度(IC10)的復(fù)方當(dāng)歸注射液、麻黃堿、馬錢子堿作用后，K562/A02細(xì)胞MDRl mRNA及P-gp表達(dá)下降(P<0.01)；而士的寧作用后K562/AO2細(xì)胞MDRl mRNA及P-gp表達(dá)無明顯變化(P>0.05)。2、非細(xì)胞毒濃度(IC10)的復(fù)方當(dāng)歸注射液作用后，K

4、562/AO2細(xì)胞MRP、TopoⅡ、GST-πmRNA表達(dá)無明顯變化(P>0.05)；TopoⅡ蛋白表達(dá)增加(P<0.01)，MRP、GST-π蛋白表達(dá)無明顯變化(P>0.05)。非細(xì)胞毒濃度(IC10)的士的寧作用后K562/AO2細(xì)胞MRP mRNA及其蛋白表達(dá)下降(P<0.01)，Topo Ⅱ、GST-πmRNA及其蛋白表達(dá)無明顯變化(P>0.05)。非細(xì)胞毒濃度(IC10)的麻黃堿、馬錢子堿作用后K562/A02細(xì)胞MRP、T

5、opoⅡ、GST-π mRNA及其蛋白表達(dá)無明顯變化(P>0.05)。 結(jié)論：1、非細(xì)胞毒濃度(IC10)的復(fù)方當(dāng)歸注射液、麻黃堿、馬錢子堿均可部分逆轉(zhuǎn)K562/AO2細(xì)胞的耐藥性，其作用途徑可能與下調(diào)K562/AO2細(xì)胞MDRL mRNA的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞膜上P-gP的表達(dá)量減少有關(guān)；而非細(xì)胞毒濃度(IC10)的士的寧對K562/A02細(xì)胞MDRl mRNA及P-gP的表達(dá)無明顯影響。2、非細(xì)胞毒濃度(IC10)的復(fù)方當(dāng)歸注射液

6、可通過上調(diào)TopoⅡ蛋白的表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)K562/AO2細(xì)胞的耐藥性，而對Topo Ⅱ mRNA表達(dá)水平無影響；且其對K562/AO2細(xì)胞MRP、GST-πmRNA及其蛋白的表達(dá)無明顯影響。非細(xì)胞毒濃度(IC10)的士的寧可通過下調(diào)MRP mRNA及其蛋白的表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)K562/AO2細(xì)胞的耐藥性，而對TopoⅡ、GST-πmRNA及其蛋白的表達(dá)無明顯影響。非細(xì)胞毒濃度(IC10)的麻黃堿、馬錢子堿對K562/AO2細(xì)胞MRP、TopoⅡ