不同齲敏感兒童變形鏈球菌臨床分離株體外致齲性研究.pdf

1、目的：探討不同齲敏感兒童口腔變形鏈球菌臨床分離株的產(chǎn)酸、耐酸及合成細胞外多糖能力的差異，分析其毒力因子在致齲過程中所起的作用，從而為完善乳牙齲危險性預(yù)測方法及乳牙齲的預(yù)防提供有力的理論和實驗依據(jù)。 方法： 1．以高齲，齲失補指數(shù)(decayed，missing，filledteeth index，dmft)≥6、中齲，6>dmft≥4，無齲,dmft=0兒童口腔中分離得到的不同基因型的變形鏈球菌111株(其中高齲組44株

2、，中齲組36株，無齲組31株)為實驗菌株，以國際標準菌株變形鏈球菌(S．mutans)ATCC 25175(血清型C)為陽性對照，于輕唾瓊脂(MS)平板復(fù)蘇，取典型菌落接種于牛心腦浸液(Brain Heart Infusion，BHI)中增菌24 h，涂片檢查為純培養(yǎng)后，配制相同濃度的菌懸液(A 540nm=1.0)，加入含5％蔗糖，不同pH值(以0.5為間隔，pH4.0-7.0)的BHI液體培養(yǎng)基中厭氧(80％N2、10％H2、10％

3、CO2)培養(yǎng)48h后，采用精密酸度計pHS-3C，測定培養(yǎng)物上清液的終末pH值，比較細菌的產(chǎn)酸能力(△pH)；將相同菌液濃度的變形鏈球菌臨床分離株菌懸液和標準株菌懸液分別在不同pH(以0.5為間隔，pH 4.0～7.0)的BHI液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后，用紫外分光光度計在540nm處測定吸光度，比較細菌的生長情況。 2．取相同濃度的各變形鏈球菌臨床分離株菌懸液和標準株的菌懸液，按菌液與含1％蔗糖的BHI液體培養(yǎng)基1:10(v、v

4、)比例接種細菌，37℃厭氧培養(yǎng)24h，離心，收集上清液，細菌沉淀物用5ml蒸餾水洗滌、離心兩次，三次上清液合并；水沈后的細菌加入0.5mol/L NaOH5ml洗滌、離心三次，合并上清液。兩部分上清液各取2ml，分別加入三倍體積無水乙醇，4℃冰箱放置過夜，離心，棄水相，沉淀分別加入5ml蒸餾水及5ml 0.1 mol/LNaOH溶液溶解，用葸酮法分別測定水溶性及水不溶性葡聚糖含量。 結(jié)果： 1．兒童高、中齲組患者口腔中分

5、離出的變形鏈球菌臨床分離株產(chǎn)酸和耐酸能力明顯高于無齲組患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，但與國際標準菌株比較，無顯著性差異(p>0.05)。在同一個體所帶不同基因型變形鏈球菌菌株的產(chǎn)酸能力和耐酸能力有差異，高齲組存在部分菌株產(chǎn)酸耐酸能力明顯高于其他菌株。 2．不論是產(chǎn)水溶性葡聚糖還是水不溶性葡聚糖能力，高、中齲組和標準株無明顯不同，但是均強于無齲組(p<0.05)；同一個體所分離的不同基因型變形鏈球菌菌株合成胞外多糖的能