脂聯(lián)素及其受體在各型慢性乙型肝炎患者肝組織的表達和意義.pdf

1、目的:乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染呈世界性流行,每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝硬化、肝衰竭和肝細胞癌。研究發(fā)現(xiàn),在急、慢性HBV感染過程中,都存在以促炎和抗炎細胞因子失衡為特征的炎癥損傷過程。脂聯(lián)素是近年發(fā)現(xiàn)的一類具有保護作用的脂肪細胞因子,其主要作用為調(diào)節(jié)能量代謝、提高胰島素的敏感性、抗炎和抗肝纖維化作用。研究證實非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholicSteatohepatitis,

2、NASH)患者血清脂聯(lián)素水平降低,并與肝臟炎癥壞死、脂肪變和纖維化相關。但脂聯(lián)素與慢性HBV感染的關系,及其對慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)預后、轉歸影響尚無確切報道。
　　 本研究通過檢測各型慢性乙型肝炎患者血清脂聯(lián)素水平,結合肝組織脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體2 mRNA和蛋白的表達,以探討脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2在各型慢性乙型肝炎發(fā)病過程中的變化特點及臨床意義。
　　 方法:收集2009年01月-

3、2010年12月我院門診和住院CHB(中度)、乙型肝炎肝硬化(Liver Cirrhosis,LC)、慢性重型乙型肝炎(Chronic SevereHepatitis B,CSHB)患者各20例。診斷均符合2005年中國《慢性乙型肝炎防治指南》和2006年中國《肝衰竭診療指南》標準。選擇同時期本院正常健康體檢者20名做為血清學健康對照。
　　 應用全自動化分析儀檢測患者門診首日或入院次日空腹血糖(FastingBlood Glu

4、cose,FBG)、血清膽固醇(Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、白蛋白(Albumin)、丙氨酸氨基轉移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、總膽紅素(Total Bilirubin,TBiL)、凝血酶原活動度(ProthrombinActivity,PTA)水平;酶聯(lián)免疫法檢測HBV血清學標志物:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;定量PCR

5、分析檢測血清HBVDNA載量。檢測抗-HAV、抗-HCV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其他嗜肝病毒及HIV感染。
　　 應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA)檢測血清脂聯(lián)素水平,嚴格按照說明書進行操作。
　　 HE染色觀察肝組織普通病理變化,Masson三重染色觀察肝組織纖維化程度。采用Power Vision TM二步法對肝組織進行脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受

6、體2免疫組織化學染色,棕黃色著色為陽性表達,用多功能病理圖象分析儀測定脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2表達面積百分比,每張片子取中央和四周五個區(qū)域,20倍物鏡下計算平均面密度(陽性面積與統(tǒng)計場面積百分比)。
　　 逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)檢測肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA的表達。
　　 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)

7、據(jù)進行分析。
　　 結果:
　　 1.各組患者人口學與生化學指標的比較
　　 三組不同類型的慢性乙型肝炎患者在年齡、性別構成比、體重指數(shù)(Body Mass Index,BMI)、TC、TG均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。與正常對照組相比,CHB組、LC組和CSHB組患者血清ALT、TBiL漸次升高,白蛋白、PTA逐漸下降,尤其以CSHB組變化顯著。
　　 2.各組患者血清脂聯(lián)素水平的變化
　　

8、CSHB組(0.821±0.149)和LC組(0.718±0.090)均較正常對照組(0.587±0.147)血清脂聯(lián)素水平明顯升高,F=13.296,P＜0.05。CHB組(0.616±0.126)與正常對照組(0.587±0.147)比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.肝組織普通病理學的變化
　　 正常對照組HE染色顯示:肝細胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列,細胞形態(tài)正常,肝板結構完整。Masson染色

9、:肝竇、中央靜脈周圍及匯管區(qū)未見纖維組織沉積;CHB患者HE染色顯示:小葉內(nèi)可見點灶狀肝細胞變性、壞死,壞死灶及肝竇內(nèi)以淋巴細胞為主的炎性細胞浸潤,匯管區(qū)擴大,部分界板損傷。Masson染色可見:擴大匯管區(qū)內(nèi)輕重不等的纖維組織沉積;LC患者HE染色突出表現(xiàn)為:肝板排列紊亂,假小葉形成。匯管區(qū)大小不一,可伴有程度不等的炎細胞浸潤及界面炎。Masson染色顯示:纖維間隔彼此交叉、連接,分割包繞正常肝細胞形成假小葉結構;CSHB患者HE染色表

10、現(xiàn)為:肝細胞大塊、亞大塊狀壞死,壞死區(qū)細胞結構脫失,伴大量炎性細胞浸潤,部分壞死區(qū)可見殘存和/或再生肝細胞島,小膽管增生,可見膽栓。Masson染色顯示:小葉結構紊亂不清,壞死區(qū)內(nèi)纖維支架塌陷,周圍組織可見大量膠原纖維增生。
　　 4.肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA表達的變化
　　 與正常對照組(0.091±0.018)(0.075±0.016)相比,三組不同類型的慢性乙型肝炎患者脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2 mRNA表達

11、均明顯升高,且以CHB0.123±0.019)(0.106±0.018)組、LC(0.196±0.017)(0.167±0.016)組、CSHB(0.245±0.028)(0.223±0.020)組順序依次遞增,各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義。F值分別為45.675和63.386,P值均小于0.05。
　　 5.肝組織脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2蛋白表達部位與強弱的變化
　　 正常肝組織僅可見少量脂聯(lián)素表達于肝細胞漿,隨著CHB向

12、LC、CSHB進展,脂聯(lián)素表達逐漸增多。對比觀察脂聯(lián)素表達部位發(fā)現(xiàn),CHB和LC組,脂聯(lián)素主要表達在肝細胞胞漿。CSHB患者脂聯(lián)素主要表達在肝竇間質(zhì)細胞,在肝細胞少量表達。肝組織脂聯(lián)素受體2表達量特點與脂聯(lián)素變化一致,但表達部位均在肝細胞漿。對正常對照組(4.044±0.815)(2.804±0.622)、CHB組(5.545±0.613)(4.775±0.458)、LC組(6.553±0.614)(5.678±0.539)和CSHB組

13、(8.482±0.772)(7.654±0.272)脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體2蛋白表達進行統(tǒng)計學檢測,差異具有統(tǒng)計學意義。F值分別為45.675和63.386,P值均小于0.05。
　　 6.相關性分析
　　 CHB組肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白水平與肝臟炎癥評分正相關,相關系數(shù)為r=0.745、r=0.891,P值均小于0.05。CSHB組:肝組織脂聯(lián)素mRN,A和蛋白水平與ALT正相關,相關系數(shù)為r=0.702、r=0.58

14、3,P值均小于0.05。與白蛋白負相關,相關系數(shù)為,r=-0.683、r=-0.641,P值均小于0.05。
　　 CHB、LC和CSHB患者血清脂聯(lián)素水平、肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白表達水平與血清HBVDNA水平均無相關,相關系數(shù)分別為r=-0.094、r=-0.131、r=-0.014、r=-0.254、r=-0.349、r=0.380、r=0.189、r=-0.302、r=-0.195,P值均大于0.05。
　　

15、結論:
　　 1.血清脂聯(lián)素水平在CHB組、LC組和CSHB組患者順序依次升高,提示血清脂聯(lián)素水平可以作為一個肝病嚴重程度的預測指標。
　　 2.肝組織脂聯(lián)素mRNA和蛋白水平與CHB患者肝臟炎癥評分、LC患者肝臟纖維化評分和CSHB患者血清ALT水平均為正相關,與CSHB患者白蛋白負相關,提示脂聯(lián)素在各型慢性乙型肝炎疾病進展過程中發(fā)揮重要作用。
　　 3.脂聯(lián)素在正常肝細胞胞漿少量表達;CHB和LC患者,脂聯(lián)素