三萜皂苷對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EM)是好發(fā)于女性生殖系統(tǒng)的一種具有侵襲性的良性疾病，指具有生長(zhǎng)活力的子宮內(nèi)膜組織在子宮腔以外部位的異常生長(zhǎng)。常引起患者慢性盆腔疼痛、痛經(jīng)、性交痛、月經(jīng)紊亂、大便痛、不孕等，是婦科常見(jiàn)但至今未能完全闡明的疾病，是個(gè)充滿困惑卻又催人探索的疾病。而現(xiàn)階段，激素類藥物是EM的主要治療藥物，但此類藥物副作用較大，且停藥后容易復(fù)發(fā)，諸多懸而未決的問(wèn)題需要我們?nèi)ソ鉀Q。因此，研發(fā)新的抗子宮內(nèi)膜異位癥的

2、藥物顯得意義重大。而中藥因其獨(dú)特的藥性理論和確切的臨床療效越來(lái)越受到了臨床工作者的重視，使得其治療子宮內(nèi)膜異位癥具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　 皂苷是由皂苷元和糖、糖醛酸組成的。皂苷元是螺旋甾烷類的皂苷，為甾體皂苷。組成皂苷的糖常見(jiàn)的有葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖。糖醛酸主要是葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸。三萜皂苷為皂苷元為三萜類的皂苷，其種類比甾體皂苷多，在自然界分布很廣泛，主要存在于豆科、五加科、遠(yuǎn)志科、葫蘆科等植物中，如人參、升

3、麻、三七、甘草等中草藥中都含有大量的三萜皂苷成分。近年來(lái)隨著色譜、波譜、活性測(cè)試等分技術(shù)的快速發(fā)展，對(duì)三萜皂苷的研究有了突破性進(jìn)展。三萜皂苷的抗癌、免疫調(diào)節(jié)、解熱、鎮(zhèn)痛、抗?jié)?、抗過(guò)敏、抗病毒、降血糖、防治心腦血管疾病等多種重要的藥理作用和生物活性均已被證實(shí)。但三萜皂苷治療子宮內(nèi)膜異位癥的研究鮮有報(bào)道。
　　 本研究采用自體子宮移植法建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，將三萜皂苷用于治療大鼠子宮內(nèi)膜異位癥。通過(guò)觀察其對(duì)大鼠EM中IL-6

4、、TNF-a、IFN-γ、NF-κB的影響，初步探討三萜皂苷對(duì)EM的作用機(jī)理，為子宮內(nèi)膜異位癥的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)以及切實(shí)有效的治療策略。
　　 方法：無(wú)需測(cè)量大鼠動(dòng)情期，按照誘發(fā)性采取自體子宮移植的方法，建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型。建模后四周，40只成模，將成模大鼠隨機(jī)分為五組：模型對(duì)照組，米非司酮組，三萜皂苷高、中、低劑量組。以上所有大鼠按給藥及分組方法灌胃28天，收集標(biāo)本后用于實(shí)驗(yàn)。
　　 1．測(cè)量用藥后異位

5、子宮內(nèi)膜的體積V2，與V1進(jìn)行比較，V1為造模成功后異位子宮內(nèi)膜的體積。觀察藥物對(duì)異位內(nèi)膜生長(zhǎng)的抑制作用，用抑制率來(lái)表示。計(jì)算公式為：抑制率(I)=(V1-V2)/V1×100％。
　　 2．收集大鼠血清及腹腔液，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫分析法(ABC-ELISA)檢測(cè)大鼠血清及腹腔液中干擾素-γ(IFN-γ)水平。
　　 3．切取各組異位子宮內(nèi)膜，HE染色觀察大鼠異位子宮內(nèi)膜病理形態(tài)學(xué)；采用PV免疫組化法檢測(cè)各組異位內(nèi)膜

6、組織中NF-κB的表達(dá)情況。
　　 4．取各組異位內(nèi)膜組織100mg左右以Trizo1試劑提取總RNA，采用RT-PCR檢測(cè)異位組織中IL-6和TNF-amRNA的表達(dá)。
　　 5．實(shí)驗(yàn)所得的所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(X-±S)表示，用SPSS13.00醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，單因素方差分析(One-WayANOVA)，以P＜O.05為差異顯著性。
　　 結(jié)果：
　　 1．子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型成功建

7、立，成模率為72.7％。治療前各組之間的異位內(nèi)膜體積的差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　 2．治療后可見(jiàn)各藥物組大鼠異位內(nèi)膜體積及其包裹下的積液均有不同程度的減少，甚至消失。與模型對(duì)照組相比，各治療組異位子宮內(nèi)膜體積均小于模型組，兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05)；其余各治療組之間兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 3．ELISA法檢測(cè)治療后各組大鼠血清及腹腔液中IFN-γ水平：模型對(duì)照組IFN-γ的含量

8、均低于各治療組，兩兩比較有顯著性差異(P＜0.05)；三萜皂苷高劑量組作用最強(qiáng)，其IFN-γ含量最高，與其他各治療組兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05)；米非司酮組和三萜皂苷中劑量組相比，無(wú)顯著性差異(P)0.05)；其余各治療組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4．光鏡下各組大鼠異位子宮內(nèi)膜病理形態(tài)學(xué)觀察：模型組異位內(nèi)膜生長(zhǎng)良好囊泡由內(nèi)到外為內(nèi)膜、肌層和漿膜層，大部分上皮細(xì)胞有分泌現(xiàn)象（形成核下空泡）。治

9、療組中，除三萜皂苷低劑量組外，其余各組異位內(nèi)膜在鏡下呈現(xiàn)上皮不同程度的變薄、萎縮，而腺體減少，甚至消失。
　　 5．PV免疫組化法檢測(cè)治療后各組異位子宮內(nèi)膜NF-κB的表達(dá)情況：檢測(cè)中陽(yáng)性者為腺上皮細(xì)胞細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒染色，各組異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中細(xì)胞漿均顯示不同程度的染色，也可見(jiàn)細(xì)胞核染色。模型對(duì)照組NF-κB的表達(dá)強(qiáng)于各治療組，兩兩比較有顯著性差(P＜0.05)；三萜皂苷高劑量組治療作用最強(qiáng)，其NF-κB的表達(dá)最弱，與

10、其他各治療組兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05)；米非司酮組和三萜皂苷中劑量組相比，NF-κB的表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 6．RT-PCR法檢測(cè)治療后各組大鼠異位內(nèi)膜組織中IL-6及TNF-amRNA表達(dá)情況：模型對(duì)照組異位內(nèi)膜組織中IL-6及TNF-amRNA表達(dá)強(qiáng)于各治療組，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；各治療組異位內(nèi)膜IL-6及TNF-amRNA蛋白的表達(dá)都被不同程度得抑制，其中以三萜皂苷高劑量