中醫(yī)“毒”邪理論探討及從“毒”論治非酒精性脂肪肝實驗研究.pdf

1、目的：隨著國家經(jīng)濟條件的改善，人民飲食習(xí)慣發(fā)生了很大變化，非酒精性脂肪性肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)發(fā)病逐漸增多。其病理機制比較復(fù)雜，迄今尚未完全闡明。前期臨床療效觀察表明排毒降脂合劑對NASH患者具有明顯的降低血脂和改善肝功能的作用，在此基礎(chǔ)上，本實驗通過觀察排毒降脂合劑對非酒精性脂肪肝模型大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽固醇(totalcholesterol

2、,TC)、甘油三脂(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low densitylipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)與超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的影響和對肝組織腫瘤壞死因子(the tumor necrosis factor-α，TNF-α)的表達(dá)的影響等方面來探討排毒

3、降脂合劑對非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用及其可能機制，為臨床使用提供實驗依據(jù)。 方法： 同批成年雄性Wisater大鼠60只，體重190±20g。普通飼料正常喂養(yǎng)一周后，隨機分為6組，每組10只。A組：正常對照組；B組：空白模型組；C1組：排毒降脂合劑大劑防治量組；C2組：排毒降脂合劑中防治量組；C3組：排毒降脂合劑小防治量組；D組：西藥對照組(脂必妥防治組)，以上6組大鼠統(tǒng)一標(biāo)號，分籠飼養(yǎng)。參考祁培宏等報道的方法配成高脂飼料

4、(5％乳清酸、10％膽固醇、20％豬油、1％蛋黃粉，1％丙基硫氧嘧啶)，除正常組常規(guī)飼養(yǎng)外，其余5組同期造模，每天給予高脂飼料喂養(yǎng)，24h飲水，攝食不限，持續(xù)8w復(fù)制大鼠NASH模型。在高脂飼料喂養(yǎng)的同時，治療組大鼠從造模8w末開始，每日給予排毒降脂合劑，按臨床成人等效量進(jìn)行換算，稀釋成1:2:4低、中、高不同濃度，C1、C2、C3組分別按低、中、高濃度排毒降脂合劑1ml/100g.d灌胃，每日1次；D組用脂必妥混懸液0.09g/1ml

5、/100g.d灌胃，每日1次；正常組和模型組均以同體積的生理鹽水1ml/100g.d灌胃，每日一次。維持4W(共12W)。以上6組大鼠于12w末全部殺檢，分離血清及留取肝組織。于模型建立及給藥期間觀察記錄動物體重、食欲、行為、狀態(tài)、毛發(fā)及死亡情況，計算肝指數(shù)，檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。肝組織腫瘤壞死因子-α(TNF-

6、α)的表達(dá)。組間比較用兩樣本均數(shù)的t檢驗行統(tǒng)計學(xué)分析，各指標(biāo)之間的相關(guān)性采用兩因素的相關(guān)分析，計量資料數(shù)據(jù)均以x±s形式表示。 結(jié)果： 1．根據(jù)模型組大鼠肝組織病理及肝功能狀態(tài)，成功復(fù)制大鼠NASH動物模型。與空白模型組相比，排毒降脂合劑大劑量組大鼠肝指數(shù)顯著降低(P<0.01)，與模型組相比，排毒降脂合劑大、中劑量組能降低血清TC、TG、LDL-C、ALT和AST(P<0.01，P<0.05)，升高血清HDL-C(I)

7、<0.01，P<0.05)，以高劑量組效果最顯著。 2．與空白模型組相比，排毒降脂合劑大劑量組顯著提高對NASH大鼠肝組織SOD水平(P<0.01)，降低MDA含量(P<0.01)，優(yōu)于排毒降脂合劑中、小劑量組(P<0.05)和脂必妥片對照組(P<0.01)。 3．與空白模型組相比，排毒降脂合劑組大鼠肝組織TNF-α的蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)，明顯優(yōu)于脂必妥片對照組(P<0.01)。 4．鏡下所見，正常組

8、大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁簿，肝細(xì)胞排列成肝索，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，細(xì)胞呈多邊形。模型組大鼠所有標(biāo)本的肝組織切片均可見彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，主要為小泡性脂肪變性，也有部分大泡性脂肪變性，同時肝小葉內(nèi)和匯管區(qū)有單核細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤，以小葉內(nèi)炎癥為主，部分大鼠肝組織小葉內(nèi)壞死灶融合成片大鼠肝細(xì)胞中度細(xì)胞水腫。排毒降脂合劑大、中劑量組肝小葉和肝竇結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列整齊，僅有少數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)有脂滴空泡，細(xì)

9、胞核結(jié)構(gòu)清晰，核膜、核仁、核質(zhì)著色正常。排毒降脂合劑小劑量組和脂必妥組小鼠肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，核模凹陷，胞質(zhì)內(nèi)脂滴明顯增多，染色體輕度腫脹。 結(jié)論： 1．對血脂的影響：排毒降脂合劑降低血清TC、TG、LDL脂質(zhì)，升高HDL從而減少FFA的肝臟毒性和TG積聚。 2．對氧化及抗氧化狀態(tài)的影響：排毒降脂合劑提高肝組織抗氧化能力，緩解氧化應(yīng)激，減少脂質(zhì)過氧化。 3．對TNF-α蛋白表達(dá)的影響：排毒降脂合劑降低TNF