三種中藥對(duì)人胃癌細(xì)胞體外抗腫瘤活性及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究目的:
   1.比較石見(jiàn)穿、核桃楸和葉下珠三藥的水提取液、乙醇提取液和水提醇沉提取液的藥物獲得率;
   2.觀察石見(jiàn)穿、核桃楸和葉下珠三藥的水提取液、乙醇提取液和水提醇沉提取液不同濃度對(duì)人體胃癌細(xì)胞株BGC-823的影響;
   3.觀察石見(jiàn)穿、核桃楸和葉下珠三藥的水提取液、乙醇提取液和水提醇沉提取液不同濃度對(duì)人體胃癌細(xì)胞株MKN-28的影響;
   4.研究葉下珠水提取液對(duì)BGC-823細(xì)胞的凋

2、亡影響。
   研究方法:
   1.藥物制備:采用熱回流提取法分別制備石見(jiàn)穿、核桃楸和葉下珠的水提取液、醇提取液、水提醇沉液。
   2.細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn):采用MTT法取處于指數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28,加入適量0.25%胰酶消化,用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成懸液,計(jì)數(shù)并種板,每孔加細(xì)胞懸液160μl,培養(yǎng)24小時(shí)。將藥液40μl分別加入各孔細(xì)胞懸液中,每個(gè)劑量重復(fù)4孔

3、.將含人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28的細(xì)胞板孵育48小時(shí)后取出,每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl,37℃溫育4h,吸出上清液,加入200μl的DMSO,混懸儀混勻后用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔光密度(OD)。計(jì)算生存率=實(shí)驗(yàn)組OD/對(duì)照組OD×100%,抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組OD/對(duì)照組OD)×100%。
   3.形態(tài)學(xué)觀察:用不同濃度的石見(jiàn)穿、核桃楸和葉下珠的水提取液、醇提取液、水提醇沉液處理人胃癌細(xì)胞株BGC-823和

4、MKN-28后,在倒置顯微鏡下觀察用藥組細(xì)胞形態(tài)變化,并拍照。
   4.細(xì)胞凋亡測(cè)定:取處于指數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞株BGC-823加不同濃度葉下珠水提取液培養(yǎng)48小時(shí)后,用適量0.02%EDTA進(jìn)行消化制成單細(xì)胞懸液,2000r/min離心,PBS平衡鹽溶液洗滌2次,配成1×106/ml細(xì)胞懸液,75%冷乙醇-20℃固定,上機(jī)測(cè)定前,離心去乙醇,PBS平衡鹽溶液洗滌2次,用0.5ml的PBS懸浮細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,加入PI染液0

5、.5ml,4℃避光染色30分鐘以上,經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過(guò)濾后,上流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞的含量。
   研究結(jié)果:
   1.同等條件下藥物獲得率為核桃楸>石見(jiàn)穿>葉下珠。
   2.石見(jiàn)穿、葉下珠、核桃楸三種提取液在作用于胃癌BGC-823、MKN-28細(xì)胞48小時(shí)時(shí),隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞的存活率下降。這三種中藥對(duì)BGC-823、MKN-28細(xì)胞而言,均具有濃度依賴(lài)作用。
   3.石見(jiàn)穿、葉下珠、核桃

6、楸提取液在作用于胃癌BGC-823、MKN-28細(xì)胞48小時(shí)時(shí),隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞的抑制率逐漸上升。這三種中藥在0.0625mg/ml-1mg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞均有抑制作用。
   4.石見(jiàn)穿、葉下珠、核桃楸提取液在作用于胃癌BGC-823、MKN-28細(xì)胞48小時(shí)時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制,且葉下珠的乙醇提取液抑制作用最強(qiáng)。
   5.細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化正常情況下,人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28呈多角形,貼壁生長(zhǎng)。在

7、三種中藥的作用下,癌細(xì)胞逐漸變圓,皺縮,貼壁細(xì)胞數(shù)減少,細(xì)胞腫脹,大小不一致,細(xì)胞間隙增寬。
   6.葉下珠水提取液濃度在0.25mg/ml~lmg/ml對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823均有明顯的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,流式細(xì)胞儀可檢測(cè)到凋亡峰。
   結(jié)論:
   1.同等條件下藥物獲得率為核桃楸>石見(jiàn)穿>葉下珠。
   2.核桃楸、葉下珠和石見(jiàn)穿在體外具有抑制人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28增殖的作用

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