中藥復(fù)方益糖康對大鼠胰島細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:1.通過本實驗，總結(jié)體外分離，培養(yǎng)原代胰島細胞的方法。
　　 2.對比觀察含有中藥復(fù)方“益糖康”的含藥血清對體外培養(yǎng)的原代大鼠胰島細胞的凋亡是否具有抑制或減緩其凋亡的影響。
　　 材料與方法：本實驗選取了正常喂養(yǎng)的Wistar大鼠，分別采用了膠原酶消化法來分離胰島，用20目和80目的不銹鋼網(wǎng)篩來過濾初步純化胰島，從而獲得了活性較高的胰島，再經(jīng)過過夜培養(yǎng)之后，活性較高的胰島再經(jīng)過胰蛋白酶的再次消化，使之變?yōu)橐葝u單細胞

2、懸液，然后用Ham’s F-10培養(yǎng)液（加入1％胎牛血清，2mmol/L的L-谷氨酰胺）洗滌后轉(zhuǎn)移到24孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)基選用DMEM培養(yǎng)基，含葡萄糖濃度為22.2 mmol·L-1。每個孔加入單細胞懸液250微升，加入血清干預(yù)，觀察血清干預(yù)后的三個時間點的胰島細胞凋亡率，它們分別是血清干預(yù)后的8小時、16小時和24小時。然后所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，得出結(jié)果。
　　 結(jié)果:1.分離培養(yǎng)的胰島形態(tài)及結(jié)構(gòu)完整，活性較高。
　　

3、 2.經(jīng)過孵育后消化的胰島，成為分散的胰島細胞，能夠成功為本實驗提供相應(yīng)的胰島分散單細胞量。
　　 3.經(jīng)過統(tǒng)計表明，灌胃中藥復(fù)方“益糖康”的血清干預(yù)組的胰島細胞凋亡率，在同一時間點上，明顯低于灌胃蒸餾水的血清干預(yù)組。
　　 結(jié)論:1.從活體Wistar大鼠分離后所得的大鼠胰島，在經(jīng)過胰蛋白酶的再次消化后，形成的單細胞懸液，是具有活性的胰島細胞，可以進行下一步的血清干預(yù)；通過此方法可以分離活體胰島，得到原代胰島細胞。