血小板無力癥基因突變的實驗研究.pdf

1、目的：對4例遺傳性血小板無力癥（GT）先證者及其父母進行表型和基因診斷，確定基因突變的位點，并探討其分子發(fā)病機制。
　　 方法：（1）通過血小板計數(shù)、血涂片觀察血小板形態(tài)、出血時間測定、血凝常規(guī)檢查和血小板聚集試驗對4例患者進行表型診斷；（2）通過流式細胞術檢測血小板表面GPⅡb（整合素αⅡb）和GPⅢa（整合素β3）的含量，并確定血小板無力癥的類型；（3）用PCR法擴增先證者aⅡb和β3基因組DNA的所有外顯子及其側翼序列；（

2、4）將PCR擴增產(chǎn)物純化后直接測序，進行基因分析。（5）檢索數(shù)據(jù)庫看是否存在多態(tài)性。
　　 結果：（1）先證者血小板計數(shù)正常、血涂片血小板分散不聚集，出血時間明顯延長，凝血象正常，對ADP誘聚劑反應低下，而對瑞斯托霉素的反應基本正常。（2）4例先證者中有3例（例1、例2、例3）血小板表面αⅡb和β3平均熒光強度均明顯下降，1例（例4）αⅡb平均熒光強度降低不顯著。（3）4例先證者中前3例為αⅡb基因突變，例4為p3基因突變。例1

3、和例3為αⅡ b純合突變，分別發(fā)生了17位外顯子的R551Q錯義突變和26位外顯子的X892無義突變；例2為αⅡ b雜合突變，發(fā)生了第28個外顯子的L965P框移突變和S957L錯義突變，此例患者母親發(fā)生了αⅡbL965P框移突變，父親發(fā)生了αⅡbS957L錯義突變；例4為發(fā)生于p3基因第9個外顯子的C400Y錯義純合突變，此例患者父親為純合C400Y錯義突變，母親為雜合C400Y錯義突變，例3例4患者父母均系近親結婚。（4）通過檢索S