血小板無(wú)力癥基因突變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：對(duì)4例遺傳性血小板無(wú)力癥（GT）先證者及其父母進(jìn)行表型和基因診斷，確定基因突變的位點(diǎn)，并探討其分子發(fā)病機(jī)制。
　　 方法：（1）通過(guò)血小板計(jì)數(shù)、血涂片觀察血小板形態(tài)、出血時(shí)間測(cè)定、血凝常規(guī)檢查和血小板聚集試驗(yàn)對(duì)4例患者進(jìn)行表型診斷；（2）通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板表面GPⅡb（整合素αⅡb）和GPⅢa（整合素β3）的含量，并確定血小板無(wú)力癥的類(lèi)型；（3）用PCR法擴(kuò)增先證者aⅡb和β3基因組DNA的所有外顯子及其側(cè)翼序列；（

2、4）將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化后直接測(cè)序，進(jìn)行基因分析。（5）檢索數(shù)據(jù)庫(kù)看是否存在多態(tài)性。
　　 結(jié)果：（1）先證者血小板計(jì)數(shù)正常、血涂片血小板分散不聚集，出血時(shí)間明顯延長(zhǎng)，凝血象正常，對(duì)ADP誘聚劑反應(yīng)低下，而對(duì)瑞斯托霉素的反應(yīng)基本正常。（2）4例先證者中有3例（例1、例2、例3）血小板表面αⅡb和β3平均熒光強(qiáng)度均明顯下降，1例（例4）αⅡb平均熒光強(qiáng)度降低不顯著。（3）4例先證者中前3例為αⅡb基因突變，例4為p3基因突變。例1

3、和例3為αⅡ b純合突變，分別發(fā)生了17位外顯子的R551Q錯(cuò)義突變和26位外顯子的X892無(wú)義突變；例2為αⅡ b雜合突變，發(fā)生了第28個(gè)外顯子的L965P框移突變和S957L錯(cuò)義突變，此例患者母親發(fā)生了αⅡbL965P框移突變，父親發(fā)生了αⅡbS957L錯(cuò)義突變；例4為發(fā)生于p3基因第9個(gè)外顯子的C400Y錯(cuò)義純合突變，此例患者父親為純合C400Y錯(cuò)義突變，母親為雜合C400Y錯(cuò)義突變，例3例4患者父母均系近親結(jié)婚。（4）通過(guò)檢索S