雷公藤內(nèi)酯醇對缺氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管形成的影響研究.pdf

1、[目的]探討雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide，T10)對缺氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管形成中的作用。
　　 [方法]
　　 1.建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的缺氧培養(yǎng)模型，在上清液中加入T10,用MTT檢測的方法，確定最佳T10抑制濃度。正常組細(xì)胞置于5％的二氧化碳恒溫環(huán)境中，用RT-PCR和Westernblot檢測正常組、缺氧組及T10治療組細(xì)胞內(nèi)VEGF、ANXA2和t-PA的基因及蛋白表達水平。
　　 2.新生C57

2、BL/6J小鼠96只隨機分為正常組、缺氧組與T10治療組，每組32只(64眼)。缺氧組與治療組于生后5天(P5)置于75％氧濃度環(huán)境中，P12返回正?？諝猸h(huán)境中，治療組小鼠給予腹腔注射T10,正常組始終置于正?？諝猸h(huán)境中。P17對正常組、缺氧組和治療組行異硫氰酸熒光素灌注造影、視網(wǎng)膜鋪片及病理切片，觀察視網(wǎng)膜新生血管生成情況；病理切片每只眼選取5張切片，雙盲法統(tǒng)計突破內(nèi)界膜細(xì)胞核數(shù)；應(yīng)用RealTimePCR分別檢測三組VEGFmRNA

3、、ANXA2mRNA和t-PAmRNA表達水平。
　　 [結(jié)果]
　　 1.T10的最佳抑制濃度為100nmol/L；治療組與缺氧組相比，降低了人臍靜脈細(xì)胞中VEGF、t-PA和ANXA2的基因和蛋白表達水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療組與正常組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2.異硫氰酸熒光素灌注視網(wǎng)膜鋪片造影正常組小鼠在P17視網(wǎng)膜血管分布均勻，無異常改變。缺氧組小鼠在P17可見視網(wǎng)膜血管明

4、顯迂曲、擴張，灌注區(qū)與無灌注區(qū)交界處發(fā)現(xiàn)大量的新生血管叢、微血管瘤及滲出。治療組小鼠在P17未見視網(wǎng)膜大面積的無灌注區(qū)，滲漏及微動脈瘤。視網(wǎng)膜病理切片：對P17小鼠突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核進行計數(shù)統(tǒng)計，正常組見到很少突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)為1.05±0.28/片/眼；缺氧組小鼠中可見大量突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管，細(xì)胞核數(shù)為81.95±1.93/片/眼，治療組可見到少量突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管，細(xì)胞核數(shù)為42.25±1.1

5、6/片/眼，缺氧組和治療組差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，治療組和正常組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.對正常組、缺氧組和治療組VEGFmRNA、ANXA2mRNA和t－PAmRNA相對表達水平進行統(tǒng)計學(xué)分析，治療組與缺氧組表達水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，治療組與正常組的表達水平無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.T10對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖有抑制作用，可以降低臍