腸滸苔多糖結(jié)構(gòu)及生物活性研究.pdf

1、本論文采用蒸餾水和稀堿溶液依次提取腸滸苔水溶性多糖，通過(guò)不同方法對(duì)兩種粗多糖進(jìn)行分級(jí)，研究多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)、抗腫瘤和免疫活性，并探討多糖的結(jié)構(gòu)與生物活性的關(guān)系。 用95％的乙醇回流后，用蒸餾水以浸提比為1：20提取多糖，常規(guī)干燥后得到腸滸苔水溶性粗多糖WE；殘?jiān)磧?、干燥后，?．5 M NaOH室溫下提取，鹽酸中和，離心，常規(guī)干燥后得堿提水溶性粗多糖AE。WE經(jīng)凍融分級(jí)、脫蛋白、離子交換層析和分子篩凝膠層析純化后得到中性糖WEA

2、和酸性糖WEB； AE經(jīng)凍融分級(jí)、脫蛋白、超濾分級(jí)和分子篩凝膠層析后得到DAEA（過(guò)膜部分）和DAEB（膜上部分）。HPLC檢測(cè)WEA、WEB、DAEA和DAEB均為單一峰，平均分子量分別為72．03kDa．60．12kDa、18．21kDa和46．80kDa。 GC分析、間羥聯(lián)苯法及離子色譜檢測(cè)表明（摩爾百分含量，以下同）：WE中含有鼠李糖（58．00％）、葡萄糖（20．25％）、木糖（13．54％）、半乳糖（2．27％）、

3、甘露糖（2．26％）和葡萄糖醛酸（3．43％）；WEA含有葡萄糖（55．24％）、鼠李糖（23．76％）、木糖（17．11％）、甘露糖（2．21％）及半乳糖（1．67％）； WEB含有鼠李糖（68．81％）、木糖（9．40％）、半乳糖（4．89％）和葡萄糖醛酸（16．89％），硫酸根19．98％。AE含有鼠李糖（15．93％）、甘露糖（18．04％）、半乳糖（13．09％）、葡萄糖（11．96％）阿拉伯糖（10．94％）、核糖（8．89

4、％）、木糖（5．29％）和葡萄糖糖醛（15．86％）；DAEA含有葡萄糖（33．69％）、鼠李糖（11．44％）、半乳糖（9．64％）、甘露糖（7．92％）、木糖（2．79％）、阿拉伯糖（7．58％）和葡萄糖醛酸（29．65％）； DAEB含有鼠李糖（69．20％）、木糖（12．90％）、葡萄糖（8．20％）、半乳糖（7．40％）及葡萄糖醛酸（2．30％），硫酸根9．6％。 對(duì)腸滸苔多糖各級(jí)分免疫活性研究表明：WE、WEA、WE

5、B、AE和DAEB能夠增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的增殖和腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬作用，促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌NO，增強(qiáng)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）活性，促進(jìn)腫瘤壞死因子—α（TNF—α）的分泌。其中水提多糖中WEB的免疫活性優(yōu)于WEA和WE；堿提多糖中DAEB的免疫活性優(yōu)于AE，而DAEA活性不明顯。 對(duì)腸滸苔多糖各級(jí)分進(jìn)行體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究表明：WE、WEA、WEB、AE、DAEA及DAEB對(duì)S180、Hela、HepG2細(xì)胞均沒(méi)有抑制作用。

6、 根據(jù)上述結(jié)果，選擇WEA、WEB和DAEB進(jìn)行抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果表明：WEA、WEB和DAEB均能抑制小鼠體內(nèi)移植性腫瘤S180的生長(zhǎng)。WEB抗腫瘤活性優(yōu)于WEA和DAEB，WEB在400 mg/kg時(shí)抑瘤率最高，為74．57％。并且WEA、WEB和DAEB均能增加荷瘤小鼠的相對(duì)脾重和相對(duì)胸腺重，增加血清中TNF—α的含量。 采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化及IR、GC、GC—MS、13C—NMR等方法對(duì)W

7、EB和DAEB進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。WEBD和WEBD—R甲基化結(jié)果比較表明WEB中Rha以（1→4）鍵型為主，還有（1→2），（1→2,4）、（1→4）、和（1→3）連接鍵型；Xyl和Gal的連接鍵型均為（1→），同時(shí)含有（1→4）—GlcA及少量（1→）—GlcA；該糖中每5個(gè)（1→4）—Rha中就有一個(gè)分支，分支點(diǎn)在O-2。通過(guò)WEB和WEBD的13C—NMR結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，WEB中硫酸根位于鼠李糖的O-3。DAEB甲基化分析結(jié)果表明DAE

8、B由（1→）、（1→4）、（1→2,4）—Rha；（1→）、（1→2，3）、（1→3）—Xyl；（1→4）—Glc及（1→3）—Gal組成；每6個(gè)（1→4）—Rha中就有一個(gè)分支，分支點(diǎn)在O-2。另外，通過(guò)對(duì)DAEB和DAEB—D的甲基化結(jié)果比較表明，大部分硫酸根位于（1→4）—Rha的O-3，還有一少部分硫酸根位于（1→3）—Xyl的O-2位。 最后，本論文檢測(cè)了硫酸根離子對(duì)WEB免疫活性的影響。結(jié)果表明，WEBD對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)