2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)是神經(jīng)系統(tǒng)最重要的生物活性分子之一,兼有神經(jīng)營養(yǎng)因子與促進神經(jīng)突起生長雙重作用,對神經(jīng)細胞的生長、發(fā)育、分化發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,是參與損傷神經(jīng)再生和功能修復(fù)的重要因子。同時,它還參與調(diào)節(jié)免疫和造血等非神經(jīng)系統(tǒng)的功能。 NGF在人體組織中含量極微,已有報導(dǎo)從胎盤中純化hNGF,但其組織來源有限,成本高產(chǎn)量低,不能滿足對hNGF的需求。利用基因工程方法獲得有生物學(xué)活性的hNGF

2、制品,對其基礎(chǔ)理論研究和臨床應(yīng)用具有重要的意義。Bac-to-Bac系統(tǒng)是一種新穎的桿狀病毒表達載體系統(tǒng),構(gòu)建及篩選重組病毒比傳統(tǒng)的桿狀病毒表達系統(tǒng)更為高效簡單快捷,業(yè)已成為研究真核基因表達較為理想的工具。 本實驗以帶有hNGF全長肽基因的重組質(zhì)粒pFastBac-preproNGF為模板,擴增出成熟肽β-NGF基因片段。PCR產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后與經(jīng)同樣雙酶切的轉(zhuǎn)移載體pFactBacl相連接,轉(zhuǎn)化DH5α細胞,構(gòu)建重組轉(zhuǎn)移載體pF

3、astBac-pNGF并進行測序。測序結(jié)果正確后,提取該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進入含有穿梭載體Bacmid的受體菌DH10Bac后發(fā)生轉(zhuǎn)座,得到含有hNGF成熟肽DNA的重組穿梭載體rBacmid-βNGF。再將這一重組穿梭載體轉(zhuǎn)染貼壁培養(yǎng)的昆蟲細胞Sf9,得到重組病毒rAcV-Bac-βNGF。經(jīng)鑒定正確后進行昆蟲細胞Sf9的感染。分別將Sf9感染后培養(yǎng)上清和細胞總蛋白進行SDS-PAGE電泳分析,結(jié)果顯示感染細胞總蛋白在14.6kDa,左右有

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