2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩62頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:Angiopoietin-1(Ang-1)是新近發(fā)現(xiàn)的促血管生成因子,在生理和病理性血管生成、穩(wěn)定、減少血管滲漏等方面扮演著重要作用。糖尿病腎病很大程度與腎臟局部微血管病變和血管生成調(diào)控因子的失衡相關。本研究旨在構建高效表達Ang-1腺病毒載體,觀察Ang-1在糖尿病大鼠腎臟中表達,為糖尿病腎病微血管病變的基因治療提供實驗依據(jù)。方法:①設計和合成引物,通過PCR從pMD18-Ang-1質(zhì)粒中擴增Ang-1基因;以In-Fusio交

2、換酶酶將EcoR I酶切PCR產(chǎn)物交換連接入同種酶切載體pDC315-GFP;并將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,以陽性克隆為模板作菌落PCR鑒定和DNA測序鑒定。②穿梭質(zhì)粒pDC315-GFP-Ang-1在脂質(zhì)體介導下與輔助包裝質(zhì)粒pBHG lox△E1,3 Cre共轉(zhuǎn)染HEK293細胞,終點稀釋法測定病毒滴度,擴增純化,觀察GFP熒光和Western Blot檢測目的蛋白的表達。③鏈脲佐菌素誘導糖尿病大鼠,尾靜脈注射Ang-1腺病毒,

3、連續(xù)不同時點取腎組織作免疫熒光、組化和RT-PCR分析Ang-1和Tie-2蛋白和基因表達。結果:①從質(zhì)粒pMD18-Ang-1中擴增、重組、酶切后獲得大約1558bp的片段,DNA測序結果與Genbank中報道的Ang-1基因序列一致。②重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細胞后可觀察GFP熒光表達,Western blot證實與GFP-Ang-1融合蛋白大小基本一致的陽性條帶;病毒滴度為1×1011 pfu/ml。③注射Ang-1腺病毒的糖尿病

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論