流體剪切力對體外培養(yǎng)的鼠破骨細(xì)胞形態(tài)和空泡型質(zhì)子泵mRNA的影響.pdf

1、口腔科學(xué)中，缺牙修復(fù)，正畸牙移動(dòng)，牙周重建及拔牙創(chuàng)的愈合等均涉及到骨代謝。頜骨處在一個(gè)不斷動(dòng)態(tài)改建的過程中，骨重建不但包括成骨細(xì)胞的新骨形成，同時(shí)還包括破骨細(xì)胞的舊骨吸收。當(dāng)破骨細(xì)胞數(shù)量增多、活性增強(qiáng)，將會(huì)導(dǎo)致骨吸收增加，往往會(huì)出現(xiàn)牙根吸收松動(dòng)等方面的疾病；反之，破骨細(xì)胞數(shù)量減少、活性降低又會(huì)導(dǎo)致骨吸收減慢，通常會(huì)出現(xiàn)牙萌出障礙等方面的疾病。在骨吸收過程中，破骨細(xì)胞被各種刺激因素(主要是應(yīng)力)激活后，胞內(nèi)的空泡型質(zhì)子泵通過轉(zhuǎn)運(yùn)H<'+>

2、而達(dá)到骨基質(zhì)的酸破壞，從而形成骨吸收陷窩。由此可見，破骨細(xì)胞空泡型質(zhì)子泵在骨改建過程中具有重要的作用。然而，由于破骨細(xì)胞是一種終末分化的細(xì)胞，存在培養(yǎng)、檢測、存活時(shí)間短、細(xì)胞數(shù)量少及無細(xì)胞株等局限性，大大限制了破骨細(xì)胞的研究。目前尚未檢索到流體剪切力對破骨細(xì)胞空泡型質(zhì)子泵mRNA影響的研究報(bào)道。 [目的]本研究旨在對鼠破骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)鑒定和流體剪切力作用下細(xì)胞形態(tài)學(xué)及空泡型質(zhì)子泵mRNA的變化作一探討。 [方法]本研究

3、通過動(dòng)物長骨機(jī)械分離法獲得破骨細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)鑒定后，對破骨細(xì)胞施加剪切應(yīng)力，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并用實(shí)時(shí)熒光精確定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測空泡型質(zhì)子泵mRNA的表達(dá)水平。 [結(jié)果]①SD一大鼠后肢長骨的機(jī)械分離法可獲得足夠的破骨細(xì)胞，并能滿足破骨細(xì)胞相應(yīng)的形態(tài)學(xué)及功能學(xué)的鑒定標(biāo)準(zhǔn)。②隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，破骨細(xì)胞數(shù)在達(dá)72h后明顯減少。③破骨細(xì)胞空泡型質(zhì)子泵ATP6V1a1及TcIRGlmRNA的表達(dá)存在時(shí)間效應(yīng)，均在培養(yǎng)24h后達(dá)到

4、峰值，至72h后，表達(dá)量急劇下降。④隨著流體剪切力作用時(shí)間的增加和作用強(qiáng)度的增大，SD-大鼠破骨細(xì)胞的形態(tài)呈波動(dòng)性變化，直徑和面積均有增大的趨勢。⑤隨著流體剪切力強(qiáng)度的增大，破骨細(xì)胞空泡型質(zhì)子泵ATP6vlal、TcIRGlmRNA的表達(dá)水平有增加的趨勢。⑥隨著流體剪切力作用時(shí)間的延長，破骨細(xì)胞空泡型質(zhì)子泵ATP6vlal、TcIRGl mRNA表達(dá)水平有增加趨勢；但隨著流體剪切力作用時(shí)間的繼續(xù)延長，破骨細(xì)胞ATP6vlal、TcIRG