杜氏利什曼原蟲兩個發(fā)育階段基因表達系列分析文庫的構建及HSP90在其階段轉變過程中的作用.pdf

1、上海交通大學博士學位論文杜氏利什曼原蟲兩個發(fā)育階段基因表達系列分析文庫的構建及HSP90在其階段轉變過程中的作用姓名：李巧麗申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：喬中東20090105庫，只能檢測已知基因，不能發(fā)現(xiàn)未知基因。因此，本研究以體外培養(yǎng)的前鞭毛體及無鞭毛體為研究對象，引入基因表達系列分析的方法，建立這兩個發(fā)育階段基因表達系列分析文庫，希望為進一步的探討其轉化機制，以及轉化過程與宿主的關系提供更多的線索。在以前的

2、研究中，研究者們報道了多種利什曼原蟲前鞭毛體的培養(yǎng)方法，簡單重復文獻中的培養(yǎng)方法沒有成功得到杜氏利什曼原蟲MHOM／CN／Gansu8801種的無鞭毛體，總結后我們發(fā)現(xiàn)不同種的利什曼原蟲其前鞭毛體的培養(yǎng)步驟和培養(yǎng)條件均有所不同。因此，在本研究中我們首先改進了杜氏利什曼原蟲MHOM／CN／Gansu8801種無外源細胞污染的無鞭毛體體外培養(yǎng)的方法，得到了大量的無鞭毛體供后續(xù)研究。接下來，我們應用基因表達系列分析(Serialanalysi

3、sofgeneexpression，SAGE)的方法建立了杜氏利什曼原蟲前鞭毛體及無鞭毛體兩個發(fā)育階段基因表達文庫。一共獲得總標簽數(shù)為40，431個，在前鞭毛體文庫和無鞭毛體文庫中分別為20，299和20，132個標簽。大約89％的基因在兩個文庫中均有表達，有968個基因的表達水平在兩個文庫之間有顯著性差異。其中，326個基因在無鞭毛體文庫中是表達下調的，642個基因表達上調。我們選取了兩個文庫中表達差異較大的標簽，BLAST查找比對找

4、到28個標簽與其對應的基因，這其中包括histone4，elongationfactor1alpha，alphatubulin，acidicribosomalprotein，LACK，ubiquitin—fusionprotein，40SribosomalproteinS2，40Sribosomalprotein$33，60Sribosomalprotein121，60SribosomalproteinL28等基兇。在這其中，延長因子1