用IgE受體結(jié)合位點(diǎn)多聚抗原肽抑制小鼠過敏性哮喘.pdf

1、目的：IgE在哮喘，季節(jié)性過敏性鼻炎以及其他過敏性疾病的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵的介導(dǎo)作用。當(dāng)變應(yīng)原初次進(jìn)入機(jī)體后，選擇性誘導(dǎo)變應(yīng)原特異性B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體應(yīng)答，而血清中游離的IgE可在不結(jié)合抗原的情況下通過其Fc片段與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面受體結(jié)合使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。機(jī)體再次接觸變應(yīng)原后，多價(jià)變應(yīng)原與致敏細(xì)胞表面兩個(gè)或者兩個(gè)以上相鄰的IgE抗體結(jié)合，使細(xì)胞膜表面受體發(fā)生交聯(lián)，觸發(fā)致敏細(xì)胞脫顆粒，釋放及合成生物活性介質(zhì)，從而引起局部或者

2、全身過敏反應(yīng)，癥狀重者可導(dǎo)致過敏性休克，危及生命。過敏性疾病已嚴(yán)重干擾了患者的工作和生活，由此帶來的社會(huì)負(fù)擔(dān)也是相當(dāng)可觀的。由于IgE在變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生發(fā)展環(huán)節(jié)中的重要作用，目前已經(jīng)成為抗變態(tài)反應(yīng)性疾病治療的一個(gè)新的靶點(diǎn)和研究熱點(diǎn)。IgE的分子結(jié)構(gòu)已清楚，在人IgE抗體中與高親和力受體以及低親和力受體結(jié)合的位點(diǎn)位于Cε3結(jié)構(gòu)域，與IgE分子Cε3結(jié)構(gòu)域相關(guān)的主動(dòng)免疫策略由于具備了特異性封閉與疫苗治療的持久性從而越來越受到重視。以此疫

3、苗來誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)IgE受體結(jié)合位點(diǎn)的抗體，通過抗原抗體結(jié)合產(chǎn)生的原子空間排列效應(yīng)或誘導(dǎo)的構(gòu)像改變來封閉IgEFc片段上與IgEFc受體結(jié)合的部位，進(jìn)而阻斷由IgE介導(dǎo)的哮喘效應(yīng)途徑。本實(shí)驗(yàn)就IgE分子受體結(jié)合位點(diǎn)多聚抗原肽疫苗免疫對(duì)過敏原所致的哮喘小鼠氣道炎癥的作用展開探討。 方法：聯(lián)合運(yùn)用多種B細(xì)胞表位分析方法預(yù)測(cè)表位，綜合分析各種結(jié)果后確定合成肽的序列和長度，人工合成人IgE分子Cε3區(qū)域內(nèi)抗原性較強(qiáng)的和實(shí)驗(yàn)相關(guān)小鼠的同

4、源性的多聚抗原肽疫苗，并以此疫苗來誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)IgE受體結(jié)合位點(diǎn)的抗體，以使機(jī)體打破對(duì)IgE的免疫耐受，主動(dòng)產(chǎn)生抗IgE抗體，進(jìn)而阻斷由IgE介導(dǎo)的哮喘效應(yīng)途徑。具體方法為用多聚抗原肽免疫新西蘭大白兔檢驗(yàn)其免疫原性。以不同佐劑、不同劑量的多聚抗原肽免疫BALB/c小鼠，確定最適宜的免疫劑量。將小鼠隨機(jī)分為健康(H)對(duì)照組、無關(guān)肽免疫(IR)哮喘對(duì)照組、弗氏佐劑(F)哮喘對(duì)照組和多聚抗原肽(P)免疫后哮喘組，后三組采用卵清蛋白(OVA

5、)腹腔致敏和連續(xù)5天同一時(shí)間滴鼻激發(fā)建立哮喘模型。造模48h收獲小鼠肺泡灌洗液(BAL)和肺組織，觀察肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)百分比和上清中IL-4濃度；觀察肺組織病理切片，分析肺內(nèi)炎癥情況。分離血清，ELISA法檢測(cè)血清中IgE含量變化。觀察多聚抗原肽對(duì)小鼠耳廓注射OVA導(dǎo)致的腫脹程度的影響。觀察疫苗免疫后對(duì)過敏原刺激后的小鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒百分率的影響。觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)各組小鼠體重和肺濕重的影響。 結(jié)論