飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白和凝血酶在腦出血后早期腦損傷中的作用.pdf

1、目的： 許多研究已證實(shí)腦出血后3天血紅素降解產(chǎn)物開始緩慢釋放，包括鐵離子，膽紅素和一氧化碳，其中鐵的釋放在腦出血介導(dǎo)的腦損傷中起重要作用。然而有研究發(fā)現(xiàn)腦出血后早期（24小時(shí)內(nèi)）也出現(xiàn)鐵介導(dǎo)的腦損傷。因此通過本實(shí)驗(yàn)探討腦出血后早期鐵的來(lái)源及其損傷機(jī)制，觀察是否存在另一種鐵相關(guān)血液成分如飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白（holo-Tf），它和凝血酶也可能參與腦出血后早期的腦損傷。 方法： 一．使用大鼠立體定向儀在大鼠右側(cè)基底核分別注射

2、飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白（holo-Tf），游離轉(zhuǎn)鐵蛋白（apo-Tf），小劑量凝血酶，凝血酶與apo-Tf復(fù)合物以及凝血酶與holo-Tf復(fù)合物5種成分制作動(dòng)物模型。基底核定位及注射方法如下：前后囟水平位，前囟向右旁開3mm，硬腦膜向下6mm。以上5種成分分別用50ul生理鹽水溶解，并用微量進(jìn)量器26號(hào)針頭以10ul/min速度注射。注射完后停針5．分鐘緩慢拔出針頭，骨蠟封閉顱骨小孔后縫合皮膚。 二．實(shí)驗(yàn)分2大組。 第一大組（5小

3、組，每組5只大鼠）右基底節(jié)分別注入apo-Tf，holo-Tf，凝血酶，apo-Tf+凝血酶，holo-Tf+凝血酶5種成分。24小時(shí)后處死并測(cè)定腦組織水含量。 第二大組（3小組，每組3只）右基底節(jié)分別注入holo-Tf，apo-Tf+凝血酶，holo-Tf+凝血酶3種成分。24小時(shí)后大鼠麻醉進(jìn)行心內(nèi)多聚甲醛（溶解于磷酸鹽緩沖生理鹽水，PH=7．4）灌洗固定，取出腦組織，放入4％多聚甲醛溶液12小時(shí)，常規(guī)脫水，透明，將腦組織石蠟

4、包埋，切片厚度為4um。用免疫組化測(cè)定8-羥基-2-脫氧鳥苷（8-OHdG）及三價(jià)鐵染色測(cè)定鐵分布。 結(jié)果： 第一大組實(shí)驗(yàn)大鼠分別注射5種不同成分后24小時(shí)測(cè)定腦組織水含量發(fā)現(xiàn)holo-Tf，apo-Tf和1U凝血酶單獨(dú)注射都不能導(dǎo)致大鼠同側(cè)及對(duì)側(cè)腦組織腦水腫，apo-Tf+凝血酶也不能引起腦水腫，而holo-Tf+凝血酶復(fù)合物則能導(dǎo)致同側(cè)皮層及基底節(jié)腦水腫，它們之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。 第二大組實(shí)驗(yàn)大鼠分別注射

5、3種不同成分后24小時(shí)免疫組化測(cè)定8-OHdG發(fā)現(xiàn)注射holo-Tf或apo-Tf+凝血酶后同側(cè)基底節(jié)8-OHdG免疫反應(yīng)為陰性，注射holo-Tf+凝血酶后同側(cè)基底節(jié)測(cè)到大量8-OHdG免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞，可對(duì)側(cè)卻沒有；三價(jià)鐵染色測(cè)定鐵分布發(fā)現(xiàn)注射holo-Tf或apo-Tf+凝血酶均未見Per1陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)，然而注射holo-Tf+凝血酶能導(dǎo)致同側(cè)腦組織Per1陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)，可對(duì)側(cè)卻沒有。 結(jié)論： 大鼠右側(cè)基底節(jié)注射h