膠原和基質(zhì)金屬蛋白酶在血管成形術(shù)后再狹窄中的表達和意義實驗研究.pdf

1、目的①評價大鼠頸動脈再狹窄模型內(nèi)膜增生和重塑對再狹窄的作用.②觀察PTA后膠原含量在血管壁各層隨時間的演變規(guī)律,觀測其超微結(jié)構(gòu)改變,探討膠原在血管再狹窄過程中的表達及意義.③觀察PTA后MMP-2、MMP-9、TIMP-1在血管壁各層的分布及動態(tài)變化特點,分析其與膠原變化、血管VSMC增殖之間的關(guān)系,探討MMPs在血管再狹窄過程中的變化及作用.材料和方法1、動物模型和分組SD雄性大鼠48只,實驗側(cè)頸總動脈改良導絲法制作再狹窄模型,對側(cè)假

2、手術(shù)頸總動脈為對照組,每組取動脈損傷后1天、3天、7天、14天、28天和42天6個觀察時間點,每個時間點8只大鼠.根據(jù)HE染色標本,實驗側(cè)選血管結(jié)構(gòu)保留完整、內(nèi)膜增生較滿意的30只動物標本,保證各時間點有5只動物,對照側(cè)隨機選取5只動物標本作對照進行后續(xù)各種染色及處理.2、病理學檢查所有標本行HE染色,對膠原纖維進行Masson三色染色法和Van Gieson染色法兩種方法進行染色,對PCNA、α-Smooth-Actin、MMP-2、

3、TIMP-1進行免疫組織化學染色,MMP-9進行免疫組織化學和原位雜交兩種染色.選取對照組、7、14、28、42天中標本各兩塊進行電鏡檢測,觀察膠原的超微結(jié)構(gòu)動態(tài)變化.3、病理學資料的圖像分析采用病理圖像分析系統(tǒng)對標本HE染片進行形態(tài)計量分析.分析膠原面積占分析面積的百分比作為膠原密度,以膠原積分光密度和膠原面積比值為膠原平均光密度,以此2指標衡量膠原隨時間的動態(tài)變化.分別計數(shù)PCNA、MMP-2、MMP-9、TIMP-1免疫組化染片和

4、MMP-9原位雜交染片內(nèi)膜、中膜、外膜陽性細胞率衡量各自的表達.結(jié)論1、大鼠頸動脈再狹窄模型中存在收縮性重塑現(xiàn)象,內(nèi)膜增生和收縮性重塑共同參與了再狹窄,該組動物模型中,內(nèi)膜增生對再狹窄的作用大于收縮性重塑.2、再狹窄過程中膠原在內(nèi)膜、外膜含量明顯升高,中膜膠原含量基本保持不變.它們共同參與再狹窄,內(nèi)膜的膠原主要與內(nèi)膜增生有關(guān),中膜和外膜膠原主要與重塑有關(guān).3、MMP-9、MMP-2、TIMP-1參與再狹窄,它們伴隨PCNA的表達,內(nèi)膜M