膠原和基質(zhì)金屬蛋白酶在血管成形術(shù)后再狹窄中的表達(dá)和意義實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的①評(píng)價(jià)大鼠頸動(dòng)脈再狹窄模型內(nèi)膜增生和重塑對(duì)再狹窄的作用.②觀察PTA后膠原含量在血管壁各層隨時(shí)間的演變規(guī)律,觀測(cè)其超微結(jié)構(gòu)改變,探討膠原在血管再狹窄過(guò)程中的表達(dá)及意義.③觀察PTA后MMP-2、MMP-9、TIMP-1在血管壁各層的分布及動(dòng)態(tài)變化特點(diǎn),分析其與膠原變化、血管VSMC增殖之間的關(guān)系,探討MMPs在血管再狹窄過(guò)程中的變化及作用.材料和方法1、動(dòng)物模型和分組SD雄性大鼠48只,實(shí)驗(yàn)側(cè)頸總動(dòng)脈改良導(dǎo)絲法制作再狹窄模型,對(duì)側(cè)假

2、手術(shù)頸總動(dòng)脈為對(duì)照組,每組取動(dòng)脈損傷后1天、3天、7天、14天、28天和42天6個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只大鼠.根據(jù)HE染色標(biāo)本,實(shí)驗(yàn)側(cè)選血管結(jié)構(gòu)保留完整、內(nèi)膜增生較滿意的30只動(dòng)物標(biāo)本,保證各時(shí)間點(diǎn)有5只動(dòng)物,對(duì)照側(cè)隨機(jī)選取5只動(dòng)物標(biāo)本作對(duì)照進(jìn)行后續(xù)各種染色及處理.2、病理學(xué)檢查所有標(biāo)本行HE染色,對(duì)膠原纖維進(jìn)行Masson三色染色法和Van Gieson染色法兩種方法進(jìn)行染色,對(duì)PCNA、α-Smooth-Actin、MMP-2、

3、TIMP-1進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,MMP-9進(jìn)行免疫組織化學(xué)和原位雜交兩種染色.選取對(duì)照組、7、14、28、42天中標(biāo)本各兩塊進(jìn)行電鏡檢測(cè),觀察膠原的超微結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化.3、病理學(xué)資料的圖像分析采用病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本HE染片進(jìn)行形態(tài)計(jì)量分析.分析膠原面積占分析面積的百分比作為膠原密度,以膠原積分光密度和膠原面積比值為膠原平均光密度,以此2指標(biāo)衡量膠原隨時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化.分別計(jì)數(shù)PCNA、MMP-2、MMP-9、TIMP-1免疫組化染片和

4、MMP-9原位雜交染片內(nèi)膜、中膜、外膜陽(yáng)性細(xì)胞率衡量各自的表達(dá).結(jié)論1、大鼠頸動(dòng)脈再狹窄模型中存在收縮性重塑現(xiàn)象,內(nèi)膜增生和收縮性重塑共同參與了再狹窄,該組動(dòng)物模型中,內(nèi)膜增生對(duì)再狹窄的作用大于收縮性重塑.2、再狹窄過(guò)程中膠原在內(nèi)膜、外膜含量明顯升高,中膜膠原含量基本保持不變.它們共同參與再狹窄,內(nèi)膜的膠原主要與內(nèi)膜增生有關(guān),中膜和外膜膠原主要與重塑有關(guān).3、MMP-9、MMP-2、TIMP-1參與再狹窄,它們伴隨PCNA的表達(dá),內(nèi)膜M