C-erbB2反義寡核苷酸誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的:卵巢癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤,在現(xiàn)有手術(shù)、放療、化療治療手段下,卵巢癌5年生存率一直徘徊在28﹪~35﹪,故有必要尋找新的治療方法,以進(jìn)一步提高卵巢癌患者的生存時(shí)間.卵巢癌和其它惡性腫瘤一樣是涉及多基因改變的疾病.因此,基困治療可能是其根本的治療途徑.方法:1.反義寡核苷酸的設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)順序互補(bǔ)于人的C-erbB2mRNA5'端起始編碼區(qū)的15個(gè)堿基序列的反義寡核苷酸,并合成相應(yīng)的正義寡核苷酸作對(duì)照,反義和正義寡核苷酸均經(jīng)硫代磷酸化修飾.

2、2.細(xì)胞培養(yǎng)將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的卵巢癌sK0v3細(xì)胞以5×l0<'4>個(gè)/ml濃度加入24孔培養(yǎng)板中,每孔加1ml.培養(yǎng)24小時(shí),細(xì)胞貼壁后分反義組、正義組和空白組三組,分別往每組中加入等量5μMol/L的反義、正義寡核苷酸和無(wú)菌雙蒸水共同培養(yǎng).3.繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法描繪細(xì)胞生長(zhǎng)曲線.4.形態(tài)學(xué)觀察 倒置相差顯微鏡和HE染色法從形態(tài)學(xué)上觀察細(xì)胞凋亡的情況.5.DNALadder測(cè)定提取細(xì)胞DNA,用1,5﹪ 瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一