C-erbB2反義寡核苷酸誘導(dǎo)卵巢癌細胞凋亡.pdf

1、目的:卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤,在現(xiàn)有手術(shù)、放療、化療治療手段下,卵巢癌5年生存率一直徘徊在28﹪~35﹪,故有必要尋找新的治療方法,以進一步提高卵巢癌患者的生存時間.卵巢癌和其它惡性腫瘤一樣是涉及多基因改變的疾病.因此,基困治療可能是其根本的治療途徑.方法:1.反義寡核苷酸的設(shè)計設(shè)計順序互補于人的C-erbB2mRNA5'端起始編碼區(qū)的15個堿基序列的反義寡核苷酸,并合成相應(yīng)的正義寡核苷酸作對照,反義和正義寡核苷酸均經(jīng)硫代磷酸化修飾.

2、2.細胞培養(yǎng)將處于指數(shù)生長期的卵巢癌sK0v3細胞以5×l0<'4>個/ml濃度加入24孔培養(yǎng)板中,每孔加1ml.培養(yǎng)24小時,細胞貼壁后分反義組、正義組和空白組三組,分別往每組中加入等量5μMol/L的反義、正義寡核苷酸和無菌雙蒸水共同培養(yǎng).3.繪制細胞生長曲線采用細胞計數(shù)法描繪細胞生長曲線.4.形態(tài)學(xué)觀察 倒置相差顯微鏡和HE染色法從形態(tài)學(xué)上觀察細胞凋亡的情況.5.DNALadder測定提取細胞DNA,用1,5﹪ 瓊脂糖凝膠電泳進一