Survivin反義寡核苷酸誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：靶向survivin合成反義寡核苷酸并將其轉(zhuǎn)染至survivin表達(dá)陽(yáng)性的人白血病株K562細(xì)胞中，研究其對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并初步探討凋亡機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)人紅白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞。針對(duì)survivin基因序列，設(shè)計(jì)合成survivin反義寡核苷酸及錯(cuò)配寡核苷酸，并通過脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染至survivin表達(dá)陽(yáng)性的K562細(xì)胞中。實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組、錯(cuò)配寡核苷酸對(duì)照組、脂質(zhì)體對(duì)照組、survivin反義

2、寡核苷酸處理組(濃度分別為200、400、600、800、1000nmol/L)。倒置光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；錐蟲藍(lán)拒染法觀察survivin反義寡核苷酸對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響；噻唑藍(lán)(MTT)法觀察survivin反義寡核苷酸對(duì)K562細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，及5-氟尿嘧啶(5-FU)聯(lián)合survivin反義寡核苷酸對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響，計(jì)算各組細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，測(cè)定IC50；Hoechst33342/PI雙熒光染色后，熒光

3、顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染survivin反義寡核苷酸以及5-FU聯(lián)合survivin反義寡核苷酸處理后K562細(xì)胞細(xì)胞核變化，計(jì)算各組細(xì)胞凋亡率；激酶活性測(cè)定方法檢測(cè)各組細(xì)胞中caspase-3活性；800nmol/Lsurvivin反義寡核苷酸處理K562細(xì)胞后，經(jīng)SDS-PAGE分離蛋白，WesternBlot檢測(cè)細(xì)胞中survivin的表達(dá)。 結(jié)論：Survivin反義寡核苷酸可抑制K562細(xì)胞增殖，提高K562細(xì)胞對(duì)5-FU的敏