EF-1A2反義寡核苷酸對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文EF-1A2反義寡核苷酸對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖和凋亡的影響姓名：董萍萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：賈金華;李萬勝20040301中文摘要義核酸有可能封閉其癌基因的高表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖達(dá)到治療目的。因此，通過反義技術(shù)封閉E F 一1 A 2 癌基因，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，可能成為卵巢癌治療的一種新手段。本實(shí)驗(yàn)利用E F - 1 A 2 反義寡核苷酸( E F - I A 2A 塒∞n s co

2、 l i g o d e o x y n u c l e o t i d e sA S ．O D N @ 作用于人卵巢癌細(xì)胞株S K O V 3 ，體外觀察E F ．I A 2A S ．O D N s 對卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞增殖和凋亡的影響，初步探討E F ．1 A 2A S —O D N s 的作用效果和機(jī)理，為卵巢癌的治療提供新的思路。方法：l 寡核苷酸的設(shè)計(jì)合成 設(shè)計(jì)針對E F - 1 A 2 基因翻譯起始位點(diǎn)包括起始密碼在內(nèi)的2 1

3、個(gè)堿基的反義寡核苷酸( A S O D N S ) 和相對應(yīng)的正義寡核苷酸( S O m 、『S ) ，并對首尾兩末端各3 個(gè)堿基進(jìn)行硫代磷酸化修飾。2 細(xì)胞培養(yǎng)將處于對數(shù)生長期的卵巢癌細(xì)胞株S K O V 3 按相應(yīng)的濃度加入培養(yǎng)瓶和9 6 孔培養(yǎng)板于3 7 ．5 ℃，c 0 2 含量5 ．0 ％，濕度9 9％的孵箱中培養(yǎng)2 4 h 后。棄掉培養(yǎng)液，以無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)4 8 h 后設(shè)反義組、正義組和空白對照組。每組加入不同濃度( 5

4、、1 0 、2 0 p m o l ／L ) 的反義、正義寡核苷酸和等量培養(yǎng)液，培養(yǎng)2 4 h 、4 8 h 和7 2 h 。。3 細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn) 采用M T T 法測細(xì)胞增殖抑制情況。4 形態(tài)學(xué)觀察倒置相差顯微鏡和G i e m u s a 染色法從形態(tài)學(xué)上觀察細(xì)胞凋亡的情況。5D N A L a d d e r 測定提取細(xì)胞D N A ，用1 ．5 ％瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一步檢測發(fā)生凋亡的特征性D N A 降解。6 流式細(xì)胞術(shù)分析b