健脾益腎解毒法防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移作用及對凋亡信號傳導(dǎo)的調(diào)控機制.pdf

1、胃癌(gastriccancer)是威脅人類生命健康常見的惡性腫瘤之一，手術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的一個重要因素，如何減少或防止復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，提高生存質(zhì)量，延長生存期，是目前胃癌研究領(lǐng)域中最迫切的課題。導(dǎo)師孫桂芝教授是工作在中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤戰(zhàn)線著名的專家，特別是在治療以胃癌為主的消化系統(tǒng)腫瘤方面有其獨到之處，近40年治療腫瘤患者達50余萬人次。本論文在對胃癌及腫瘤轉(zhuǎn)移認識的歷代大量文獻梳理基礎(chǔ)上，對導(dǎo)師防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移方面的臨床經(jīng)驗，用

2、現(xiàn)代科學(xué)手段進行了深入挖掘，并以615小鼠前胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移模型為載體，采用流式細胞技術(shù)(FCM)、TUNEL、AV-PI、RealtimeRT-PCR、免疫組化(IHC)等技術(shù)，從整體—細胞—基因分子—信號傳導(dǎo)等層次，深入探討了健脾益腎解毒法防治胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子機制，從一個側(cè)面揭示了中醫(yī)藥防治胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移理論依據(jù)和導(dǎo)師臨床治驗的科學(xué)內(nèi)涵。 一、理論研究1歷代醫(yī)家著述對后世胃癌及腫瘤轉(zhuǎn)移中醫(yī)治療學(xué)具有指導(dǎo)意義通過祖國醫(yī)

3、學(xué)對胃癌及腫瘤轉(zhuǎn)移的認識歷代文獻梳理，可以看出，中醫(yī)對這類病證的認識分為五個時期，(1)春秋戰(zhàn)國以前為萌芽時期，此時雖沒有具體到對于胃癌及轉(zhuǎn)移的認識，但對于相關(guān)病證已有初步的認識。(2)春秋戰(zhàn)國至東漢末年，為初步形成時期，對于胃癌相關(guān)的癥狀，病因與發(fā)病，診治與預(yù)后的有了一定的認識。(3)晉、隋、唐是研究與發(fā)展時期，關(guān)于胃癌相關(guān)病證的體征上有了更深一步的描述，治療上出現(xiàn)了更多的方法。(4)宋金元是充實時期，這個時期產(chǎn)生了諸多醫(yī)學(xué)流派，也產(chǎn)

4、生了很多學(xué)術(shù)觀點，充實了胃癌相關(guān)病癥認識。(5)明、清是一個系統(tǒng)與初步完善時期，出現(xiàn)了許多關(guān)于前人觀點的系統(tǒng)記載的著作，不論是在理論上，還是臨床運用上都達到了系統(tǒng)與初步完善的程度。充分挖掘祖國醫(yī)學(xué)文獻這一寶庫，并以此為切入點，探討現(xiàn)代中醫(yī)胃癌轉(zhuǎn)移辨證論治規(guī)律并指導(dǎo)臨床實踐，將對當代胃癌轉(zhuǎn)移中醫(yī)治療學(xué)的發(fā)展具有重要意義。 2導(dǎo)師孫桂芝教授防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)經(jīng)驗導(dǎo)師根據(jù)治病求本、扶正祛邪的指導(dǎo)思想，結(jié)合胃癌術(shù)后患者“本虛標實”的證

5、候特點，(1)倡導(dǎo)以健脾益腎解毒為主的治療大法，遣方用藥攻補兼施；(2)診斷以辨病為先，治療以辨證為主；(3)提出防治并重，長期服藥鞏固療效；(4)強調(diào)注意飲食生活調(diào)攝。大量的臨床實踐顯示長期堅持健脾益腎解毒法中醫(yī)藥治療具有改善胃癌患者生存質(zhì)量，抑制癌細胞復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，穩(wěn)定和縮小瘤體，延長生存期的作用。 二、臨床研究1導(dǎo)師孫桂芝教授防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移臨床藥證研究利用數(shù)據(jù)挖掘生物信息技術(shù)，以導(dǎo)師使用方藥為線索，對臨床治療胃癌的351張原

6、始處方從多個角度進行分析對比、綜合歸納，以藥證為綱領(lǐng)，以導(dǎo)師理論精髓為依據(jù)，發(fā)掘?qū)煛半S證用藥”的規(guī)律。其處方藥證規(guī)律總結(jié)如下：(1)在“以法統(tǒng)方”的基礎(chǔ)上，根據(jù)胃癌辨證六個基本證型，常用基礎(chǔ)方分別是：四君子湯、小陷胸湯、生脈散和玉女煎、橘皮竹茹湯、三仁湯、柴胡疏肝散。(2)遣方用藥中涉及214味藥物，根據(jù)出現(xiàn)頻次和頻率分布歸納總結(jié)了23味最為常用藥物，將它們重新組合成方，充分體現(xiàn)了導(dǎo)師扶正祛邪并舉防治胃癌學(xué)術(shù)思想的核心內(nèi)涵。(3)常用

7、23味中藥按藥性理論進行分析，性溫性平味甘的藥物的使用處于較穩(wěn)定的高水平，說明溫補是導(dǎo)師臨床治療胃癌常用治法，與其認為胃癌以脾胃虛寒者居多相符合。另外苦寒藥次之，說明清熱解毒是其臨床常用治法之二。兩者相合，充分體現(xiàn)了攻補兼施的原則。(4)六組基礎(chǔ)方中常見61味藥物按其功能分類，其中補虛藥居首位，清熱解毒藥、活血化瘀藥、理氣藥使用次之，同時采用理氣、溫里、化濕、化痰等從多方面多層次治療，一方面說明胃癌防治的復(fù)雜性，另一方面說明導(dǎo)師在辨證論

8、治基礎(chǔ)上遣方用藥，主次分明，組合有緒。(5)臨床常用藥對實為用藥精華之所在。(6)不但辨證論治，依據(jù)中醫(yī)藥理論選方用藥；而且辨病論治，結(jié)合中醫(yī)藥的現(xiàn)代藥理研究進展，重視一藥多用，體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合理論防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的優(yōu)勢。 2健脾益腎解毒法對進展期胃癌術(shù)后患者生存質(zhì)量影響的臨床研究為了更系統(tǒng)、更全面評價健脾益腎解毒法對進展期胃癌術(shù)后患者生存質(zhì)量(QOL)的影響，探討其在治療和康復(fù)過程中的作用，旨在為綜合治療干預(yù)提供理論依據(jù)。采用

9、EORTCQLQ-C30核心量表測評健脾益腎解毒法對46例進展期胃癌術(shù)后患者治療前后QOL的影響。按治療前后各領(lǐng)域(子量表)標準化得分計算，進展期胃癌患者經(jīng)歷手術(shù)和化療后，應(yīng)用健脾益腎解毒法組方湯藥治療3-6個月，不但可以明顯提高總體健康和生存質(zhì)量，而且在生存質(zhì)量量表的多個領(lǐng)域均有顯著改善，突出表現(xiàn)在物理癥狀、角色功能、情緒功能、社會功能和身體功能方面。以上幾個領(lǐng)域通過主成分分析正是此量表中第一主成分，從而更加說明該治法在改善生存質(zhì)量方

10、面的積極貢獻。本研究結(jié)果表明進展期胃癌術(shù)后患者堅持長期健脾益腎解毒法中醫(yī)藥治療必將受益，同時也表明在一個理想的腫瘤綜合治療方案中，中醫(yī)藥療法是必不可少的。 三、實驗研究本課題實驗研究以615小鼠前胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移模型為載體，采用流式細胞技術(shù)(FCM)、TUNEL、AV-PI、RealtimeRT-PCR、免疫組化(IHC)等多種技術(shù)方法，從整體—細胞—基因分子—信號傳導(dǎo)等層次，深入探討了該治法所組JYJF防治胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分

11、子機制，從一個側(cè)面揭示了攻補兼施并重的治則防治腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的科學(xué)內(nèi)涵。 1建立和臨床術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相類似的615小鼠前胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移動物模型，為動態(tài)觀察術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，研究復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機制及治療奠定了基礎(chǔ)。 2中藥復(fù)方JYJF對于615小鼠前胃癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)和遠處肺轉(zhuǎn)移有一定的抑制作用(復(fù)發(fā)瘤抑制率為63.11﹪和肺轉(zhuǎn)移抑制率為27.8﹪)，特別能明顯控制復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的程度，提高生存質(zhì)量，延長生存期(生命延長率為94.44﹪)。

12、 3應(yīng)用不同檢測凋亡的方法，證實改變腫瘤細胞和機體T淋巴細胞凋亡的敏感性是JYJF防治復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要作用機制。 4中藥復(fù)方JYJF可以提高T淋巴細胞的增殖能力，降低T細胞的凋亡能力，表現(xiàn)在可以降低T細胞的Fas表達，提高FasL表達，從而提高機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視能力，降低腫瘤細胞免疫逃逸。通過對T淋巴細胞增殖和凋亡兩方面的檢測可以較全面評價機體細胞免疫狀態(tài)，為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移提供新的思路。 5細胞凋亡信號傳導(dǎo)紊亂是腫

13、瘤發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要機制之一，中藥復(fù)方JYJF可以通過共同調(diào)控Fas死亡受體途徑和線粒體途徑，最終激活凋亡效應(yīng)型Caspase-3引起腫瘤細胞凋亡。 6中藥復(fù)方JYJF防治復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的作用可能分子機制在于可以促進腫瘤細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因Fas蛋白和mRNA表達，降低FasL蛋白和mRNA表達；進而提高起始型Caspase-8的活性；同時提高凋亡調(diào)控基因Bax蛋白和mRNA表達，降低Bcl-2/Bax比例，從而減弱Bcl-2蛋白和m

14、RNA表達抑制細胞凋亡的作用，降低腫瘤細胞線粒體膜電位△ψm和降低細胞內(nèi)PH值，使細胞酸化，通過線粒體途徑有效地放大了凋亡信號；最終活化Caspase-3導(dǎo)致細胞凋亡。這些為中藥復(fù)方的多靶點效應(yīng)增添了實驗依據(jù)。 四、本研究特色和創(chuàng)新之處1臨床研究中，把中醫(yī)理論思維與數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)相結(jié)合，以臨床治療胃癌原始處方為線索，進行分析對比、綜合歸納，以藥證為綱領(lǐng)，尋找隨證用藥的規(guī)律，揭示了導(dǎo)師孫桂芝教授扶正祛邪并舉防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)思想的

15、科學(xué)內(nèi)涵。為繼承挖掘名老中醫(yī)臨床經(jīng)驗提供新思路。未見同類研究報道。 2實驗研究中，以動物體內(nèi)實驗為對象，從機體淋巴細胞和腫瘤細胞兩方面，從復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移兩個角度，從外源性和內(nèi)源性兩個途徑，研究細胞凋亡信號傳導(dǎo)紊亂與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，及健脾益腎解毒法對其調(diào)控的分子機制，揭示攻補兼施治則的科學(xué)性，為防治腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移治則治法研究提供了新的實驗依據(jù)。 3首次應(yīng)用EORTCQLQ-C30(V3.0)量表測評中藥復(fù)方維護和改善進展期