健脾益腎解毒法防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移作用及對(duì)凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、胃癌(gastriccancer)是威脅人類(lèi)生命健康常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，手術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的一個(gè)重要因素，如何減少或防止復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，提高生存質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期，是目前胃癌研究領(lǐng)域中最迫切的課題。導(dǎo)師孫桂芝教授是工作在中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤戰(zhàn)線著名的專(zhuān)家，特別是在治療以胃癌為主的消化系統(tǒng)腫瘤方面有其獨(dú)到之處，近40年治療腫瘤患者達(dá)50余萬(wàn)人次。本論文在對(duì)胃癌及腫瘤轉(zhuǎn)移認(rèn)識(shí)的歷代大量文獻(xiàn)梳理基礎(chǔ)上，對(duì)導(dǎo)師防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移方面的臨床經(jīng)驗(yàn)，用

2、現(xiàn)代科學(xué)手段進(jìn)行了深入挖掘，并以615小鼠前胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移模型為載體，采用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)、TUNEL、AV-PI、RealtimeRT-PCR、免疫組化(IHC)等技術(shù)，從整體—細(xì)胞—基因分子—信號(hào)傳導(dǎo)等層次，深入探討了健脾益腎解毒法防治胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，從一個(gè)側(cè)面揭示了中醫(yī)藥防治胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移理論依據(jù)和導(dǎo)師臨床治驗(yàn)的科學(xué)內(nèi)涵。 一、理論研究1歷代醫(yī)家著述對(duì)后世胃癌及腫瘤轉(zhuǎn)移中醫(yī)治療學(xué)具有指導(dǎo)意義通過(guò)祖國(guó)醫(yī)

3、學(xué)對(duì)胃癌及腫瘤轉(zhuǎn)移的認(rèn)識(shí)歷代文獻(xiàn)梳理，可以看出，中醫(yī)對(duì)這類(lèi)病證的認(rèn)識(shí)分為五個(gè)時(shí)期，(1)春秋戰(zhàn)國(guó)以前為萌芽時(shí)期，此時(shí)雖沒(méi)有具體到對(duì)于胃癌及轉(zhuǎn)移的認(rèn)識(shí)，但對(duì)于相關(guān)病證已有初步的認(rèn)識(shí)。(2)春秋戰(zhàn)國(guó)至東漢末年，為初步形成時(shí)期，對(duì)于胃癌相關(guān)的癥狀，病因與發(fā)病，診治與預(yù)后的有了一定的認(rèn)識(shí)。(3)晉、隋、唐是研究與發(fā)展時(shí)期，關(guān)于胃癌相關(guān)病證的體征上有了更深一步的描述，治療上出現(xiàn)了更多的方法。(4)宋金元是充實(shí)時(shí)期，這個(gè)時(shí)期產(chǎn)生了諸多醫(yī)學(xué)流派，也產(chǎn)

4、生了很多學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，充實(shí)了胃癌相關(guān)病癥認(rèn)識(shí)。(5)明、清是一個(gè)系統(tǒng)與初步完善時(shí)期，出現(xiàn)了許多關(guān)于前人觀點(diǎn)的系統(tǒng)記載的著作，不論是在理論上，還是臨床運(yùn)用上都達(dá)到了系統(tǒng)與初步完善的程度。充分挖掘祖國(guó)醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)這一寶庫(kù)，并以此為切入點(diǎn)，探討現(xiàn)代中醫(yī)胃癌轉(zhuǎn)移辨證論治規(guī)律并指導(dǎo)臨床實(shí)踐，將對(duì)當(dāng)代胃癌轉(zhuǎn)移中醫(yī)治療學(xué)的發(fā)展具有重要意義。 2導(dǎo)師孫桂芝教授防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)導(dǎo)師根據(jù)治病求本、扶正祛邪的指導(dǎo)思想，結(jié)合胃癌術(shù)后患者“本虛標(biāo)實(shí)”的證

5、候特點(diǎn)，(1)倡導(dǎo)以健脾益腎解毒為主的治療大法，遣方用藥攻補(bǔ)兼施；(2)診斷以辨病為先，治療以辨證為主；(3)提出防治并重，長(zhǎng)期服藥?kù)柟摊熜В?4)強(qiáng)調(diào)注意飲食生活調(diào)攝。大量的臨床實(shí)踐顯示長(zhǎng)期堅(jiān)持健脾益腎解毒法中醫(yī)藥治療具有改善胃癌患者生存質(zhì)量，抑制癌細(xì)胞復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，穩(wěn)定和縮小瘤體，延長(zhǎng)生存期的作用。 二、臨床研究1導(dǎo)師孫桂芝教授防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移臨床藥證研究利用數(shù)據(jù)挖掘生物信息技術(shù)，以導(dǎo)師使用方藥為線索，對(duì)臨床治療胃癌的351張?jiān)?/p>

6、始處方從多個(gè)角度進(jìn)行分析對(duì)比、綜合歸納，以藥證為綱領(lǐng)，以導(dǎo)師理論精髓為依據(jù)，發(fā)掘?qū)煛半S證用藥”的規(guī)律。其處方藥證規(guī)律總結(jié)如下：(1)在“以法統(tǒng)方”的基礎(chǔ)上，根據(jù)胃癌辨證六個(gè)基本證型，常用基礎(chǔ)方分別是：四君子湯、小陷胸湯、生脈散和玉女煎、橘皮竹茹湯、三仁湯、柴胡疏肝散。(2)遣方用藥中涉及214味藥物，根據(jù)出現(xiàn)頻次和頻率分布?xì)w納總結(jié)了23味最為常用藥物，將它們重新組合成方，充分體現(xiàn)了導(dǎo)師扶正祛邪并舉防治胃癌學(xué)術(shù)思想的核心內(nèi)涵。(3)常用

7、23味中藥按藥性理論進(jìn)行分析，性溫性平味甘的藥物的使用處于較穩(wěn)定的高水平，說(shuō)明溫補(bǔ)是導(dǎo)師臨床治療胃癌常用治法，與其認(rèn)為胃癌以脾胃虛寒者居多相符合。另外苦寒藥次之，說(shuō)明清熱解毒是其臨床常用治法之二。兩者相合，充分體現(xiàn)了攻補(bǔ)兼施的原則。(4)六組基礎(chǔ)方中常見(jiàn)61味藥物按其功能分類(lèi)，其中補(bǔ)虛藥居首位，清熱解毒藥、活血化瘀藥、理氣藥使用次之，同時(shí)采用理氣、溫里、化濕、化痰等從多方面多層次治療，一方面說(shuō)明胃癌防治的復(fù)雜性，另一方面說(shuō)明導(dǎo)師在辨證論

8、治基礎(chǔ)上遣方用藥，主次分明，組合有緒。(5)臨床常用藥對(duì)實(shí)為用藥精華之所在。(6)不但辨證論治，依據(jù)中醫(yī)藥理論選方用藥；而且辨病論治，結(jié)合中醫(yī)藥的現(xiàn)代藥理研究進(jìn)展，重視一藥多用，體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合理論防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的優(yōu)勢(shì)。 2健脾益腎解毒法對(duì)進(jìn)展期胃癌術(shù)后患者生存質(zhì)量影響的臨床研究為了更系統(tǒng)、更全面評(píng)價(jià)健脾益腎解毒法對(duì)進(jìn)展期胃癌術(shù)后患者生存質(zhì)量(QOL)的影響，探討其在治療和康復(fù)過(guò)程中的作用，旨在為綜合治療干預(yù)提供理論依據(jù)。采用

9、EORTCQLQ-C30核心量表測(cè)評(píng)健脾益腎解毒法對(duì)46例進(jìn)展期胃癌術(shù)后患者治療前后QOL的影響。按治療前后各領(lǐng)域(子量表)標(biāo)準(zhǔn)化得分計(jì)算，進(jìn)展期胃癌患者經(jīng)歷手術(shù)和化療后，應(yīng)用健脾益腎解毒法組方湯藥治療3-6個(gè)月，不但可以明顯提高總體健康和生存質(zhì)量，而且在生存質(zhì)量量表的多個(gè)領(lǐng)域均有顯著改善，突出表現(xiàn)在物理癥狀、角色功能、情緒功能、社會(huì)功能和身體功能方面。以上幾個(gè)領(lǐng)域通過(guò)主成分分析正是此量表中第一主成分，從而更加說(shuō)明該治法在改善生存質(zhì)量方

10、面的積極貢獻(xiàn)。本研究結(jié)果表明進(jìn)展期胃癌術(shù)后患者堅(jiān)持長(zhǎng)期健脾益腎解毒法中醫(yī)藥治療必將受益，同時(shí)也表明在一個(gè)理想的腫瘤綜合治療方案中，中醫(yī)藥療法是必不可少的。 三、實(shí)驗(yàn)研究本課題實(shí)驗(yàn)研究以615小鼠前胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移模型為載體，采用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)、TUNEL、AV-PI、RealtimeRT-PCR、免疫組化(IHC)等多種技術(shù)方法，從整體—細(xì)胞—基因分子—信號(hào)傳導(dǎo)等層次，深入探討了該治法所組JYJF防治胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分

11、子機(jī)制，從一個(gè)側(cè)面揭示了攻補(bǔ)兼施并重的治則防治腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的科學(xué)內(nèi)涵。 1建立和臨床術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相類(lèi)似的615小鼠前胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型，為動(dòng)態(tài)觀察術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，研究復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機(jī)制及治療奠定了基礎(chǔ)。 2中藥復(fù)方JYJF對(duì)于615小鼠前胃癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處肺轉(zhuǎn)移有一定的抑制作用(復(fù)發(fā)瘤抑制率為63.11﹪和肺轉(zhuǎn)移抑制率為27.8﹪)，特別能明顯控制復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的程度，提高生存質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期(生命延長(zhǎng)率為94.44﹪)。

12、 3應(yīng)用不同檢測(cè)凋亡的方法，證實(shí)改變腫瘤細(xì)胞和機(jī)體T淋巴細(xì)胞凋亡的敏感性是JYJF防治復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要作用機(jī)制。 4中藥復(fù)方JYJF可以提高T淋巴細(xì)胞的增殖能力，降低T細(xì)胞的凋亡能力，表現(xiàn)在可以降低T細(xì)胞的Fas表達(dá)，提高FasL表達(dá)，從而提高機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視能力，降低腫瘤細(xì)胞免疫逃逸。通過(guò)對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖和凋亡兩方面的檢測(cè)可以較全面評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)，為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移提供新的思路。 5細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)紊亂是腫

13、瘤發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一，中藥復(fù)方JYJF可以通過(guò)共同調(diào)控Fas死亡受體途徑和線粒體途徑，最終激活凋亡效應(yīng)型Caspase-3引起腫瘤細(xì)胞凋亡。 6中藥復(fù)方JYJF防治復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的作用可能分子機(jī)制在于可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因Fas蛋白和mRNA表達(dá)，降低FasL蛋白和mRNA表達(dá)；進(jìn)而提高起始型Caspase-8的活性；同時(shí)提高凋亡調(diào)控基因Bax蛋白和mRNA表達(dá)，降低Bcl-2/Bax比例，從而減弱Bcl-2蛋白和m

14、RNA表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡的作用，降低腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位△ψm和降低細(xì)胞內(nèi)PH值，使細(xì)胞酸化，通過(guò)線粒體途徑有效地放大了凋亡信號(hào)；最終活化Caspase-3導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。這些為中藥復(fù)方的多靶點(diǎn)效應(yīng)增添了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 四、本研究特色和創(chuàng)新之處1臨床研究中，把中醫(yī)理論思維與數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)相結(jié)合，以臨床治療胃癌原始處方為線索，進(jìn)行分析對(duì)比、綜合歸納，以藥證為綱領(lǐng)，尋找隨證用藥的規(guī)律，揭示了導(dǎo)師孫桂芝教授扶正祛邪并舉防治胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)思想的

15、科學(xué)內(nèi)涵。為繼承挖掘名老中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn)提供新思路。未見(jiàn)同類(lèi)研究報(bào)道。 2實(shí)驗(yàn)研究中，以動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)為對(duì)象，從機(jī)體淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞兩方面，從復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移兩個(gè)角度，從外源性和內(nèi)源性?xún)蓚€(gè)途徑，研究細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)紊亂與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，及健脾益腎解毒法對(duì)其調(diào)控的分子機(jī)制，揭示攻補(bǔ)兼施治則的科學(xué)性，為防治腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移治則治法研究提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 3首次應(yīng)用EORTCQLQ-C30(V3.0)量表測(cè)評(píng)中藥復(fù)方維護(hù)和改善進(jìn)展期