硝酸鹽對湖羊瘤胃硝態(tài)氮消失率、發(fā)酵特性及微生物區(qū)系的影響.pdf

1、試驗(yàn)一旨在研究日糧硝酸鹽水平對湖羊瘤胃硝態(tài)氮動態(tài)消失率和發(fā)酵特性的影響。選取6頭9月齡，體況良好，體重相近(30±5) kg且裝有永久性瘺管的湖羊，采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，試驗(yàn)分為6期，每期14d，采樣期2d，每期日糧（DM基礎(chǔ)）添加硝酸鉀的劑量分別為:對照組0％、1％、2％、3％、4％、5％，測定喂前及喂后0.5、1、1.5、2、4、6、8h瘤胃液硝酸鹽和亞硝酸鹽含量及瘤胃發(fā)酵參數(shù)。晨飼后2h通過頸靜脈采血，測定高鐵血紅蛋白含量。第一期結(jié)束

2、后采集瘤胃液進(jìn)行體外培養(yǎng)，并使用ANKOM RFS產(chǎn)氣測量系統(tǒng)測定凈產(chǎn)氣量。結(jié)果表明:高鐵血紅蛋白的含量隨硝酸鹽添加量的增加而顯著升高(P＜0.01)，最高達(dá)0.32％。湖羊在采食1h后瘤胃液硝酸鹽含量達(dá)到最高(0.95～2.14 g/L)，亞硝酸鹽含量在喂后1.5 h達(dá)到最高(0.93～6.22 tmol/L)。添加硝酸鹽顯著提高瘤胃液pH值(P＜0.01)和喂后2h的氨態(tài)氮含量（P＜0.01）以及乙酸/丙酸的比例，添加量高于3％會降

3、低微生物蛋白和總揮發(fā)性脂肪酸的含量，硝酸鹽添加量為2％時(shí)微生物蛋白和總揮發(fā)性脂肪酸的合成量最高，最有利于微生物發(fā)酵。體外產(chǎn)氣試驗(yàn)結(jié)果表明，各組產(chǎn)氣速率無顯著差異，5％組凈產(chǎn)氣量有下降趨勢（P＜0.1）。
　　試驗(yàn)二旨在研究日糧硝酸鹽水平對瘤胃細(xì)菌群落的影響。采樣期飼喂前采集瘤胃液，提取總DNA，利用Illumina Miseq平臺對16S V4區(qū)測序及Real-time PCR分析。結(jié)果表明，湖羊瘤胃中Bacteroidetes、

4、 Firmicutes、Proteobacteria、Fibrobacteres、 Verrucomicrobia的總和占細(xì)菌群落總數(shù)的90％以上，為瘤胃中的優(yōu)勢菌門。屬水平上各組中均以Prevotella、Selenomonas、Succinivibrio為優(yōu)勢菌屬，平均比例分別為47.87％、5.76％、2.37％。各組間Shanon指數(shù)無顯著差異。Chao1指數(shù)隨硝酸鹽添加量的增加而升高，5％組顯著高于對照組（P＜0.05）。添加

5、硝酸鹽能夠提高湖羊瘤胃細(xì)菌的豐度，但不會改變瘤胃細(xì)菌的多樣性和菌群結(jié)構(gòu)。Real-time PCR結(jié)果顯示，Campylobacter fetus的相對倍數(shù)隨硝酸鹽的添加量的增加而增高，5％組相對倍數(shù)最高，差異極顯著（P＜0.01）。
　　試驗(yàn)三旨在研究日糧中硝酸鹽水平對湖羊瘤胃真菌和原蟲區(qū)系的影響。采樣期飼喂前采集瘤胃液，提取總DNA，擴(kuò)增18S V4區(qū)，利用Illumina Miseq測序平臺進(jìn)行測序并對結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析

6、。結(jié)果表明，日糧中添加硝酸鹽對Shannon指數(shù)和Chao1指數(shù)無顯著影響，不會改變湖羊瘤胃真菌、原蟲的多樣性。湖羊瘤胃優(yōu)勢真菌為Saccharomyces、Malassezi、Phaeosphaeria、Davidiella、 Issatchenkia，對照組的Saccharomyces相對豐度顯著高于2％、3％、5％組，其他各處理組的真菌屬無顯著差異;原蟲屬中，2％組的Unculture屬相對豐度極顯著高于其他處理組(P＜0.01)