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文檔簡介
1、目的:通過腰大肌壓迫輸尿管法,建立生后48小時內的新生Wistar鼠腎積水動物模型,檢測輸尿管梗阻期間及梗阻解除后病腎組織和腎盂尿中一系列細胞因子:如轉化生長因子-β1(TGF-β1)、單核細胞趨化因子-1(MCP-1)、胰島素樣生長因子-1(IGF-1)、內皮素-1(ET-1)轉錄水平和蛋白水平表達的改變,以及尿中含量的變化,擬從分子水平探尋評定先天性腎積水術前病腎損害程度以及術后病腎恢復的客觀、可靠指標,為臨床小兒腎積水治療方法的選
2、擇及術后療效預測提供實驗依據。
方法:
1、動物模型制作:建立先天性腎積水的動物模型(即腰大肌壓迫輸尿管法制作部分輸尿管梗阻及梗阻解除的動物模型)。取生后48h內的新生Wistar鼠72只,隨機分6組,每組12只;隨機選擇1組行假手術,作為對照組,余5組用腰大肌壓迫法制作左側部分輸尿管梗阻模型,然后再隨機分為組2-組6。組1(對照組):假手術組;組2:梗阻后3周處死;組3:梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后2周處
3、死;組4:梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后6周處死;組5:梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后8周處死;組6:梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后12周處死。
2、實驗指標的檢測:(1)、HE染色行病腎組織結構改變的檢查,并做病理分級;(2)、檢測病腎組織TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1轉錄水平和蛋白水平在梗阻期間及梗阻解除后的改變;(3)、檢測病腎尿TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1在梗阻期間及梗阻解除后的變
4、化。
結果:
1、新生鼠梗阻性腎積水動物模型成功建立,病腎組織經HE染色后,參照Elder等的標準進行病理分級,對照組12例全部為Ⅰ級,實驗組(死亡9例,存活51例)Ⅰ級7例,Ⅱ級13例,Ⅲ級20例,Ⅳ級11例,Ⅴ級0例;病腎組織結構改變隨梗阻解除時間延長而逐漸恢復。
2、病腎組織內TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1轉錄水平及蛋白水平的表達變化:
(1)、TGF-β1、
5、MCP-1、ET-1mRNA的表達在梗阻后隨病理分級的增加而遞增,其中TGF-β1在各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),MCP-1、ET-1在不同病理分級組間比較,差異不全有統(tǒng)計學意義;IGF-1雖隨病理分級的增加而遞減,但在各病理分級組間比較,差異不全有統(tǒng)計學意義。TGF-β1、MCP-1、ET-1蛋白水平的表達也隨病理分級的增加而遞增,而IGF-1則隨病理分級的增加而遞減。
(2)、梗阻解除后,隨梗
6、阻解除時間的延長TGF-β1、MCP-1、ET-1轉錄水平及蛋白水平的表達逐漸下降,其中梗阻解除后12周TGF-β1水平已降至正常,而IGF-1轉錄水平及蛋白水平的表達則逐漸升高。
3、病腎腎盂尿內TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1水平的改變:
(1)、病腎尿TGF-β1、MCP-1、ET-1在梗阻后隨病理分級的增加而遞增,其中TGF-β1在各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),
7、MCP-1、ET-1在不同病理分級組間比較,差異不全有統(tǒng)計學意義;IGF-1雖隨病理分級的增加而遞減,但在各病理分級組間比較,不全有統(tǒng)計學意義。
(2)、梗阻解除后,隨梗阻解除時間的延長病腎尿TGF-β1、MCP-1、ET-1的含量逐漸升高,其中梗阻解除后12周尿TGF-β1水平已降至正常,而尿IGF-1的含量則隨梗阻解除時間的延長逐漸下降。
結論:
1、本研究通過腰大肌壓迫輸尿管法成功地制作了
8、新生鼠腎積水的動物模型(新生鼠部分輸尿管梗阻建立及梗阻解除的動物模型),可作為臨床研究小兒腎積水的理想動物模型。
2、新生鼠腎積水病腎組織TGF-β1轉錄水平及蛋白水平在各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學意義,且在梗阻解除術后12周已降至正常,可用于判定病腎的損害程度以及恢復情況。
3、新生鼠腎積水病腎尿TGF-β1在梗阻后各病理分級組間比較,差異均有統(tǒng)計學意義,且在梗阻解除術后12周已恢復至正常,是評定腎積
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