黃芪、冬蟲夏草對(duì)新生鼠腎積水病腎TGF-β1、IGF-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過(guò)制作腰大肌壓迫輸尿管,建立新生鼠腎積水動(dòng)物模型。應(yīng)用黃芪、冬蟲夏草提取液對(duì)新生鼠腎積水動(dòng)物模型進(jìn)行皮下注射,檢測(cè)動(dòng)物模型中梗阻建立后病腎組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)的表達(dá)變化,以及檢測(cè)病腎尿TGF-β1、IGF-1的水平。以探討黃芪、冬蟲夏草對(duì)新生鼠腎積水病腎的損害有否保護(hù)作用,從而為臨床更好地治療先天性腎積水提供一種新的思路。
　　方法:
　　1、動(dòng)物模型的建立選用生

2、后48h內(nèi)的Wistar新生鼠96只,隨機(jī)分為8組,每組12只。隨機(jī)選擇1組行假手術(shù),作為對(duì)照組;余7組采用腰大肌壓迫部分左輸尿管制作新生鼠腎積水動(dòng)物模型,任選其中1組作為模型組,余各組再隨機(jī)分為干預(yù)1組~干預(yù)6組:
　?、佟⒔M1:對(duì)照組(假手術(shù)組):手術(shù)后(術(shù)中暴露左輸尿管后即關(guān)閉手術(shù)切口) Wistar新生鼠皮下注射生理鹽水(1ml/kg/天)。
　?、?、組2:模型組:手術(shù)后(術(shù)中建立左側(cè)輸尿管部分梗阻模型)Wistar

3、新生鼠皮下注射生理鹽水(1ml/kg/天)。
　　③、干預(yù)1組(黃芪組1-低劑量組):動(dòng)物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射低劑量的黃芪注射液(1ml/kg/天),飼養(yǎng)3周標(biāo)本取材后、頸椎脫髓法處死動(dòng)物。
　?、?、干預(yù)2組(黃芪組2-高劑量組):動(dòng)物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射高劑量的黃芪注射液(3ml/kg/天),飼養(yǎng)3周標(biāo)本取材后、頸椎脫髓法處死動(dòng)物。
　?、?、干預(yù)3組(冬蟲夏草組1-低劑量組):動(dòng)物模型

4、建立后Wistar新生鼠皮下注射低劑量的冬蟲夏草提取液(0.5ml/kg/天),飼養(yǎng)3周標(biāo)本取材后、頸椎脫髓法處死動(dòng)物。
　?、?、干預(yù)4組(冬蟲夏草組2-高劑量組):動(dòng)物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射高劑量的冬蟲夏草提取液(2.0ml/kg/天),飼養(yǎng)3周標(biāo)本取材后、頸椎脫髓法處死動(dòng)物。
　　⑦、干預(yù)5組(低劑量黃芪+冬蟲夏草組-低劑量組):動(dòng)物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射低劑量的黃芪注射液(1ml/kg/天)

5、和冬蟲夏草提取液(0.5ml/kg/天),飼養(yǎng)3周標(biāo)本取材后、頸椎脫髓法處死動(dòng)物。
　?、唷⒏深A(yù)6組(高劑量黃芪+冬蟲夏草組-高劑量組):動(dòng)物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射高劑量的黃芪注射液(3ml/kg/天)和冬蟲夏草提取液(2.0ml/kg/天),飼養(yǎng)3周標(biāo)本取材后、頸椎脫髓法處死動(dòng)物。
　　2、各種指標(biāo)的檢測(cè):(1)、采集下列各組:對(duì)照組、模型組、干預(yù)組1-6的病腎組織標(biāo)本,部分-80℃冰箱保存、部分甲醛固定后做

6、成石蠟標(biāo)本待檢:①、石蠟標(biāo)本切片進(jìn)行HE染色后、光鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)的變化;②、石蠟標(biāo)本切片后、通過(guò)免疫組織化學(xué) PV法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)的表達(dá),應(yīng)用Image-ProPlus圖像分析軟件測(cè)量平均光密度值;③、采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)病腎組織內(nèi)TGF-β1 mRNA、 IGF-1 mRNA的表達(dá)變化;(2)、動(dòng)物處死時(shí)收集各組病腎腎盂尿液,應(yīng)用ELISA法檢測(cè)尿TGF-β1、尿IGF

7、-1的水平。
　　結(jié)果:
　　1、動(dòng)物模型建立期間,動(dòng)物的存活情況:
　　新生Wistar鼠共96只,建立腎積水梗阻模型及喂養(yǎng)期間死亡5只(麻醉過(guò)深致死1只、術(shù)中死亡2只、喂養(yǎng)期間死亡2只),存活91只(94.79％)。
　　2、病腎組織形態(tài)學(xué)的變化:
　　(1)、肉眼觀:對(duì)照組雙腎大小、形態(tài)一致,腎包膜光整,腎實(shí)質(zhì)質(zhì)地等同;模型組病腎明顯增大,腎包膜張力高,腎包膜與腎實(shí)質(zhì)粘連重、不易分離,腎實(shí)質(zhì)菲薄如紙,

8、腎盂明顯擴(kuò)張、積水;干預(yù)組:病腎增大,但小于模型組病腎,腎實(shí)質(zhì)薄,腎盂擴(kuò)張、積水。
　　(2)、光鏡下病腎組織結(jié)構(gòu)的變化:
　　對(duì)照組:雙腎腎小球結(jié)構(gòu)、腎小管結(jié)構(gòu)發(fā)育正常,腎小囊未見擴(kuò)張。模型組:病腎腎小球結(jié)構(gòu)形態(tài)怪異、失常,腎小球鮑曼氏囊明顯擴(kuò)張,腎小管明顯擴(kuò)張。干預(yù)組:病腎腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)異常,腎小球鮑曼氏囊輕度擴(kuò)張,腎小管擴(kuò)張,但腎小球、腎小管的損害較模型組明顯減輕,隨藥物劑量的增大、以及聯(lián)合用藥,病腎組織結(jié)構(gòu)的損害呈逐

9、漸減輕的趨勢(shì)。
　　3、病腎組織內(nèi)TGF-β1、IGF-1蛋白水平與轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)
　　對(duì)照組腎組織內(nèi) TGF-β1低表達(dá),TGF-β1mRNA也低表達(dá);腎組織內(nèi) IGF-1高表達(dá),IGF-1mRNA也高表達(dá)。模型組病腎組織內(nèi) TGF-β1高表達(dá),TGF-β1mRNA表達(dá)明顯升高;病腎組織內(nèi)IGF-1低表達(dá),IGF-1mRNA表達(dá)明顯減低。干預(yù)各組病腎組織內(nèi) TGF-β1均有不同程度的表達(dá),低劑量組病腎 TGF-β1的表達(dá)比

10、高劑量組、聯(lián)合用藥組增多,但仍明顯低于模型組;在病腎組織內(nèi)IGF-1也有不同程度的表達(dá),但低劑量組病腎 IGF-1的表達(dá)比高劑量組、聯(lián)合用藥組減低,仍明顯高于模型組。對(duì)照組與模型組病腎組織中相應(yīng) TGF-β1、IGF-1水平間比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),模型組與干預(yù)各組病腎組織中相應(yīng)TGF-β1、IGF-1水平間比較,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對(duì)照組與干預(yù)各組病腎組織中相應(yīng)TGF-β1、IGF-1水平間比較,差異

11、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。干預(yù)各組相應(yīng)的低劑量組與高劑量組病腎組織TGF-β1、IGF-1水平間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　4、各組病腎腎盂尿內(nèi)TGF-β1、IGF-1水平的變化
　　在對(duì)照組中腎盂尿液TGF-β1含量低,而IGF-1含量高。模型組中病腎腎盂尿液中TGF-β1含量高,而IGF-1含量低。干預(yù)各組病腎腎盂內(nèi)尿液TGF-β1、IGF-1水平介于對(duì)照組與模型組之間。對(duì)照組與模型組相應(yīng)病腎尿TG

12、F-β1、IGF-1水平間比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型組與干預(yù)各組相應(yīng)病腎尿 TGF-β1、IGF-1水平間比較,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);對(duì)照組與干預(yù)各組相應(yīng)病腎尿TGF-β1、IGF-1水平間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。干預(yù)各組相應(yīng)的低劑量組與高劑量組病腎尿TGF-β1、IGF-1水平間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、應(yīng)用黃芪、冬蟲夏草對(duì)新生鼠腎積水動(dòng)