非諾貝特改善大鼠實驗性自身免疫性心肌炎及其對Th17細胞相關(guān)因子的作用機制研究.pdf

1、研究背景:心血管疾病(cardiovascular disease)是引起社會整體發(fā)病率和死亡率居高不下的主要病因。心肌炎(Myocarditis)是一種異質(zhì)性的心肌炎癥疾病，多數(shù)心肌炎患者可發(fā)展為以進行性心衰為主要特征的擴張型心肌病(Dilated Cardiomyopathy，DCM)，預(yù)后較差。因此對心肌炎發(fā)生發(fā)展過程的研究，并利用其特點進行針對性治療顯得尤為重要。目前為止，心肌炎的發(fā)病機制尚不明確，有研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫反應(yīng)在心肌

2、炎及DCM的發(fā)生發(fā)展中扮演極其重要的角色。本實驗以自身免疫性心肌炎為基礎(chǔ)展開研究。
　　 在經(jīng)典的輔助性T細胞亞群Th1/Th2研究過程中，發(fā)現(xiàn)了一種新型的分化發(fā)育和功能特征顯著不同的輔助性T細胞Th17。目前研究認為Th17與集體抗胞外菌感染和一些自身免疫疾病的關(guān)系密切，因此探索Th17細胞的分化與調(diào)控將有助于認識其在抗感染免疫和自身免疫性疾病中的作用機制，也有利于自身免疫性疾病生物學治療靶點的發(fā)現(xiàn)。
　　 目的:探討

3、非諾貝特(fenofibrate)對自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠的治療效果及其對Th17細胞相關(guān)因子的作用機制。
　　 方法:1）體內(nèi)實驗:建立大鼠EAM模型;于免疫后第0天，治療組給予非諾貝特灌胃，EAM組給予生理鹽水灌胃。免疫后的第17天處死大鼠取心臟，通過心體重量比、HE染色，以及應(yīng)用實時定量PCR檢測心臟的ANP、BNP來評估心肌炎導(dǎo)致心衰的嚴重程度;同時分別檢測大鼠心臟及脾臟細胞TH17相關(guān)的IL-6、IL-17、R

4、OR-γ t、IL-23P19、FOX-p3細胞因子的mRNA表達水平;進一步應(yīng)用Western Blot分別檢測大鼠心臟及脾臟細胞中PPAR-α的蛋白變化。2）體外實驗:通過IL-6、TGF-β誘導(dǎo)脾細胞模擬體外自身免疫性炎癥過程，誘導(dǎo)組給予IL-6+TGF-β，非諾貝特組給予IL-6+TGF-β+非諾貝特。細胞培養(yǎng)48h后應(yīng)用實時定量PCR檢測IL-17、ROR-γ t、FOX-p3的mRNA表達水平;進一步在非諾貝特組的基礎(chǔ)上給予

5、PPAR-α阻斷劑MK886后再次檢測IL-17、ROR-γ t、FOX-p3的表達變化。
　　 結(jié)果:在體內(nèi)實驗中，非諾貝特組大鼠的心體重量比和心肌的炎癥浸潤程度與EAM組相比有明顯減輕，反映心衰的指標ANP、BNP水平也顯著降低，Th17分化相關(guān)因子IL-6、IL-17、ROR-γ t、IL-23P19的表達水平呈下降趨勢，而抑制Th17分化的特異性FOX-p3因子在非諾貝特治療組明顯升高;此外，PPAR-α蛋白表達水平在非