黃芩苷對大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎的保護作用及其機制探討.pdf

1、急性播散性腦脊髓炎、多發(fā)性硬化是較常見的中樞神經(jīng)脫髓鞘疾病，目前認為它們是CD4+T淋巴細胞介導的以炎性脫髓鞘為特征的一類自身免疫性疾病。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是研究該病的理想動物模型。在疾病恢復過程中，淋巴細胞以凋亡的方式被清除，從而終止了對神經(jīng)系統(tǒng)的免疫攻擊。糖皮質(zhì)激素被公認為對EAE有治療作用，其治療與促進T細胞凋亡有關(guān)。但這類藥有抑制正常免疫、水鈉潴留等副作用，一定程度上限制了其臨床使用。以前的實驗已證實黃芩苷可通過

2、抑制NF-kB的活性，減少細胞因子的產(chǎn)生而對感染性腦水腫起保護作用。那么，黃芩苷對EAE有否保護作用呢?目前國內(nèi)外鮮見報道。如果實驗能夠證實黃芩苷對EAE有保護作用，則可望成為一種理想的治療EAE的新藥。 一.大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型制備 目的：建立大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型，并討論模型制作中的有關(guān)問題。 方法：健康6～8周齡Wistar大鼠30只隨機分為①空白對照組(CON，n=8)；②

3、完全福氏佐劑組(CFA，n=10)；③EAE組(n=12)，采用四足墊皮內(nèi)注射豚鼠全脊髓勻漿(GPSPH)和自制完全福氏佐劑(CFA，含滅活卡介苗6 mg／mL)混合乳劑，誘導Wistar大鼠EAE模型。動物免疫抗原后，每天予以神經(jīng)功能評分，稱體重，觀察發(fā)病日期。免疫后14 d處死動物，取大鼠腦干、脊髓(腰膨大處)組織，常規(guī)病理切片、HE染色、免疫組織化學法檢測白質(zhì)髓鞘堿性蛋白(MBP)抗原。 結(jié)論：本方法制作Wistar大鼠：

4、EAE模型成功，該模型價格相對低廉、成功率高、易于制作，可重復性強。 二. 黃芩苷對大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎的保護作用及其機制探討 目的：觀察黃芩苷對大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎的保護作用和黃芩苷對EAE大鼠CNS浸潤的炎性細胞凋亡的影響來探討其保護作用的可能機制。 方法：健康6～8周Wistar大鼠42只隨機分為4組：①空白對照組(CON，n=8)；②實驗性自身免疫性腦脊髓炎組(EAE，n=12)；③地塞米

5、松治療組(DXM：n=l2)；④黃芩苷治療組(BAC，n=lO)。DXM組在抗原免疫后1周予以地塞米松2mg／(kg．d)×7d，腹腔注射；BAC組在抗原免疫后1周予以黃芩苷溶液200mg／(kg．d)×7d，腹腔注射；EAE組和CON組每日以同體積的生理鹽水腹腔注射。分別觀察各組動物臨床發(fā)病率、前后體重比、神經(jīng)功能評分等，大鼠免疫14d后處死，取脊髓(腰膨大處)行石蠟包埋、病理切片，比較各組：HE染色的病灶數(shù)，免疫組織化學檢測MBP，