大黃素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎的影響.pdf

1、心肌炎(myocarditis)是心臟的炎癥性疾病，是擴(kuò)張型心肌病(dilatedcardiomyopathy, DCM)的主要病因，并可導(dǎo)致青少年發(fā)生心力衰竭及猝死。心肌炎的具體發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚，但越來(lái)越多的證據(jù)表明炎癥和免疫因素在心肌炎和DCM的發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用。因此，抗炎治療和免疫治療已經(jīng)成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。
　　 由心肌肌球蛋白免疫誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎(experimentalautoimmune

2、myocarditis，EAM)大鼠模型可以作為人類(lèi)急性心肌炎疾病的模型。EAM是T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，免疫后的21天為心臟炎癥的高峰期。單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞及T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在EAM的發(fā)生和發(fā)展中均起著至關(guān)重要的作用，抑制炎性細(xì)胞因子、Th1及Th17型細(xì)胞因子可以緩解EAM的心肌損傷。
　　 NF-κB是一種快反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子，它能夠調(diào)節(jié)編碼細(xì)胞因子、趨化因子和粘附分子的基因表達(dá)。NF-κB在EAM的心肌損害的調(diào)節(jié)過(guò)程中起著非常關(guān)

3、鍵的作用，之前有研究表明在EAM大鼠中，通過(guò)減少促炎細(xì)胞因子如IL-1β、TNF-α和IL-6而起到的心臟保護(hù)作用有可能是通過(guò)抑制NF-κB的激活而實(shí)現(xiàn)的。另外，抑制NF-κB也能夠抑制T細(xì)胞的激活。
　　 大黃素（1，3，8-三羥基-6甲基蒽醌）是一種蒽醌衍生物，長(zhǎng)期以來(lái)一直被用做抗炎劑。大黃素具有抗炎和免疫抑制作用。雖然大黃素的抗炎作用機(jī)制尚未完全闡明，但大黃素已經(jīng)被證實(shí)能夠抑制炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和T淋巴細(xì)胞的增殖。

4、　　 在這項(xiàng)研究中，我們觀察了大黃素在自身免疫性心肌炎中的作用，并研究其是否通過(guò)抑制NF-κB的激活及抑制炎性細(xì)胞因子、Th1型及Th17型細(xì)胞因子的產(chǎn)生而對(duì)EAM有一定的保護(hù)作用。
　　 材料與方法
　　 (1)6周齡雄性Lewis大鼠32只，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。Lewis大鼠隨機(jī)分為四組:EAM組，低劑量大黃素組，高劑量大黃素組和對(duì)照組。于實(shí)驗(yàn)0天及7天，EAM組和大黃素組用心肌肌球蛋白/完全弗氏

5、佐劑免疫，而對(duì)照組僅用完全弗氏佐劑假性免疫。低劑量大黃素組和高劑量大黃素組于0天起，分別給予25mg和50mg大黃素每日一次灌胃治療，共21天，而EAM組和對(duì)照組每日給予蒸餾水灌胃。每日測(cè)量大鼠體重，21天時(shí)行心臟超聲心動(dòng)圖檢查后處死大鼠，腔靜脈取血，心臟稱重，評(píng)價(jià)肉眼心臟病理積分，計(jì)算心臟/體重比(heart weight/bodyweight，Hw/Bw)。
　　 (2)21天時(shí)經(jīng)胸廓進(jìn)行心臟超聲心動(dòng)圖檢查。M型超聲心動(dòng)圖在

6、乳頭肌水平測(cè)量左室舒張末內(nèi)徑(LVEDd)和左室收縮末內(nèi)徑(LVEDs);計(jì)算左室短軸縮短率(LVFS)。
　　 (3)心肌組織10％福爾馬林固定，石蠟包埋切片，行HE染色及Masson's染色后光鏡下觀察心肌組織炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度，計(jì)算病理積分。
　　 (4)采用Western blot法檢測(cè)心肌組織NF-κ Bp65蛋白的表達(dá)水平。
　　 (5)采用ELISA法檢測(cè)血清中IL-1β、TNF-α、 IFN-γ及IL

7、-17的水平。
　　 (6)各實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)均采用x±s表示，利用spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異比較采用t-檢驗(yàn)或采用單因素方差分析。P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 (1)超聲心動(dòng)圖分析結(jié)果:EAM組及大黃素組大鼠的心臟左室功能指數(shù)(LVEDs，LVEDd和LVFS)與對(duì)照組相比均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大黃素組大鼠的LVEDs與LVEDd與EAM組相比明顯減小，而LVFS則明顯增高。結(jié)果說(shuō)明

8、，大黃素的治療抑制了EAM大鼠的左室心肌重塑，改善了心臟功能。
　　 (2)心臟/體重比(Hw/Bw):與對(duì)照組相比，EAM組的體重明顯下降而心臟明顯增大。大黃素明顯抑制了由于炎癥所致的心臟重量增加，心臟重和心臟/體重比值均比EAM組明顯下降。
　　 (3)病理積分:大黃素組的肉眼觀病理積分較EAM組明顯降低。鏡下觀，對(duì)照組無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。在EAM組，可以觀察到中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及多核巨細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。大黃素的治療顯著減

9、輕了炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，大黃素組鏡下觀病理積分較EAM組顯著降低。此外，我們用組織學(xué)評(píng)分進(jìn)行半定量評(píng)估，結(jié)果顯示大黃素組的病理積分顯著低于EAM組。總之，大黃素減輕了EAM大鼠的心肌炎癥程度。
　　 (4)心肌組織NF-κBp65的表達(dá)水平:Western blot的結(jié)果顯示在EAM組和大黃素組NF-κBp65的水平較對(duì)照組均明顯升高(P＜0.05)。經(jīng)大黃素干預(yù)后，大黃素組NF-κBp65的水平較EAM組明顯降低（P＜0.05）。

10、這個(gè)結(jié)果說(shuō)明大黃素可通過(guò)抑制NF-κBp65通路對(duì)心肌組織起到保護(hù)作用。
　　 (5)血清細(xì)胞因子水平:在實(shí)驗(yàn)的21天，通過(guò)ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ和IL-17的水平。血清中促炎細(xì)胞因子(IL-1β，TNF-α)和Th1(IFN-γ)、Th17(IL-17)型細(xì)胞因子水平在EAM組較對(duì)照組顯著升高。在大黃素組，這些細(xì)胞因子的水平較EAM組明顯降低。這個(gè)結(jié)果說(shuō)明，大黃素可能通過(guò)抑制炎