介導大鼠海馬CA1區(qū)癲癇樣活動的離子型谷氨酸受體的變化.pdf

1、目的：
　　本研究采用正常大鼠海馬腦片灌流離子型γ-氨基丁酸受體(GABAA受體)拮抗劑荷包牡丹堿(bicuculline,Bic)引起癲癇樣活動;并應(yīng)用腦立體定位技術(shù)在大鼠海馬CA3中心區(qū)通過微量注射海人草酸(Kainicacid,KA)來建立顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠模型。以離體腦片細胞外場電位記錄方法觀測離子型谷氨酸受體在大鼠海馬CA1區(qū)癲癇樣活動中的變化,為進一步探討癲癇的發(fā)生機制

2、提供依據(jù)。
　　方法：
　　1模型建立
　　1.1顳葉癲癇模型雄性Wistar大鼠,體重200~240克,清潔級。大鼠經(jīng)水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后,固定于立體定位儀上,在右側(cè)海馬CA3中心區(qū)(AP:-4.0mm,ML:4.4mm,DV:3.8mm)用微量注射針注入2.5~3μlKA(0.4μg/μl),注射15min,留針10min,術(shù)后縫合頭皮。大鼠急性發(fā)作等級參照Racine標準分級,達到Ⅳ級及以上視為

3、建模成功。正常對照組在海馬CA3區(qū)注射等量生理鹽水。
　　1.2急性癲癇樣活動正常大鼠離體海馬腦片灌流GABAA受體拮抗劑Bic(30μmol/L)以引起癲癇樣活動。
　　2離體腦片制備大鼠用2％戊巴比妥鈉麻醉后迅速斷頭取腦,置于持續(xù)給予95%O2和5%CO2混合氣的4℃人工腦脊液(artificialcerebrospinalfluid,ACSF)中。待腦組織冷卻后沿海馬槽纖維走向切成400μm厚的腦片,并將其移至含(30

4、±2)℃ACSF的孵育槽中,持續(xù)通入混合氣,孵育1~2h。
　　3場電位記錄將孵育的腦片移至記錄槽,持續(xù)灌流95%O2和5%CO2混合氣飽和的ACSF,灌流速度2ml/min,溫度32℃。刺激海馬輻射層Schaffer側(cè)支通路,在CA1區(qū)錐體細胞層記錄群峰電位(populationspike,PS)。
　　4統(tǒng)計學分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析。實驗結(jié)果以?x±s表示,組間均數(shù)用t檢驗進行比較,P<0.05具有統(tǒng)計學意

5、義。
　　結(jié)果：
　　1海馬CA1區(qū)癲癇樣活動PS的變化正常大鼠海馬腦片CA1區(qū)錐體細胞層通常記錄到單個PS;正常腦片灌流Bic(30μmol/L)后可引起多個PS的癇樣放電,PS數(shù)為(5.07±0.30,n=11),第1個PS的幅度明顯增大,為灌流前的(150.86±22.56)%(n=11,P﹤0.01);TLE模型大鼠腦片記錄到癇樣放電,PS數(shù)為(6.12±0.33,n=9),與正常腦片相比,引起癲癇樣活動的腦片記錄到

6、的PS數(shù)顯著增加(P﹤0.01)。
　　2介導海馬CA1區(qū)PS的離子型谷氨酸受體的變化正常腦片CA1區(qū)錐體細胞記錄到的PS主要由非N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體介導。正常腦片灌流Bic后記錄到的PS除了由非NMDA受體介導外,NMDA受體也參與癇樣電位的介導。灌流NMDA受體拮抗劑DL-2-氨基-5-磷酸戊酸(DL-2-amino-5-phosphonovalericacid,AP

7、V,50μmol/L),第1個PS幅度無明顯變化(n=11,P﹥0.05),而第4和第5個PS幅度明顯降低(n=11,P﹤0.05;n=9,P﹤0.05)。TLE模型大鼠海馬腦片灌流APV后,第1個PS幅度也無明顯變化(n=9,P﹥0.05),第4和第5個PS幅度明顯降低(n=8,P﹤0.05;n=8,P﹤0.01),并可進一步抑制灌流非NMDA受體拮抗劑6-氰基-7-硝基喹噁啉-2,3-土衛(wèi)四(6-cyano-7-nitroquino