乳腺癌細(xì)胞中miR-146a表達(dá)調(diào)控的表觀遺傳學(xué)機(jī)制.pdf

1、部分miRNAs可以通過(guò)抑制癌基因的表達(dá)，發(fā)揮腫瘤抑制基因的作用，在腫瘤惡性進(jìn)程中，常伴隨這部分miRNAs基因沉默失活。HDAC作為輔阻遏物參與形成轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合體，介導(dǎo)腫瘤抑制基因沉默失活導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，用HDACi抑制HDAC活性，能重新激活沉默基因的表達(dá)。
　　用HDACiTSA作用于乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞后，檢測(cè)到7個(gè)miRNAs表達(dá)升高，5個(gè)miRNAs表達(dá)降低；其中miR-146a，在TSA作用前處于沉默狀態(tài)，檢測(cè)不到

2、其表達(dá)，在TSA作用后表達(dá)升高。通過(guò)在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-146a，驗(yàn)證了它可以靶向CXCR43`-UTR，通過(guò)抑制翻譯來(lái)降低其表達(dá)，從而降低SDF-1趨化的腫瘤細(xì)胞侵襲，并抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖，確立了miR-146a作為腫瘤抑制基因的地位。
　　為了研究miR-146a基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制，用5`-RACE實(shí)驗(yàn)確定了miR-146a基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，用于分析其啟動(dòng)子區(qū)調(diào)節(jié)因子結(jié)合狀態(tài)。通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，組蛋白H3K56

3、乙?；图せ罨虮磉_(dá)緊密相關(guān)，不加TSA刺激時(shí)，幾乎檢測(cè)不到miR-146a基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3K56乙?；殡S基因沉默；給予TSA刺激時(shí)，啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3K56乙酰化水平顯著升高，伴隨激活基因表達(dá)。
　　進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CBP和P300是組蛋白H3K56乙?；D(zhuǎn)移酶，作為輔激動(dòng)蛋白參與激活miR-146a基因表達(dá)；HDAC1是組蛋白H3K56去乙?；?，作為輔阻遏物導(dǎo)致miR-146a基因沉默。TSA作用于細(xì)胞，能抑制H

4、DAC1活性，HDAC1作為輔阻遏物的作用被解除，miR-146a基因啟動(dòng)子區(qū)募集了更多的輔激動(dòng)蛋白CBP和P300，后者介導(dǎo)了啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3K56乙酰化，伴隨PolⅡ結(jié)合到啟動(dòng)子區(qū)，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，從而揭示了表觀遺傳學(xué)因素參與調(diào)節(jié)miR-146a基因表達(dá)的機(jī)制。
　　不同腫瘤細(xì)胞中，存在miR-146a基因表觀遺傳學(xué)調(diào)控多樣性，在觀察的乳腺癌，胃癌，肝癌，肺癌，卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中，單獨(dú)使用TSA或者聯(lián)合使用去甲基化藥物5