缺氧對乳腺癌細(xì)胞miR-210表達(dá)及侵襲能力的影響.pdf

1、目的:
　　以二氯化鈷（Cobalt dichloride，CoCl2）作為缺氧劑，體外模擬乳腺癌細(xì)胞生長的缺氧（hypoxia）環(huán)境，檢測miR-210在缺氧條件下在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中的表達(dá)，并觀察缺氧條件對乳腺癌細(xì)胞體外侵襲能力的動態(tài)影響，探索微小RNA（microRNA）、缺氧環(huán)境與乳腺癌（breast cancer）之間的內(nèi)在聯(lián)系。
　　方法:
　　常規(guī)培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株，以CoCl2作為缺氧劑

2、，利用實時熒光定量聚合酶鏈技術(shù)（Realtime polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測miR-210表達(dá)，利用 Transwell技術(shù)檢測細(xì)胞的侵襲（invasion）能力。RT-PCR實驗分組：缺氧組，常氧對照組。缺氧組MCF-7細(xì)胞以終濃度為150umol/L的CoCl2溶液缺氧培養(yǎng)24h，對照組細(xì)胞添加等劑量 PBS緩沖液常規(guī)培養(yǎng)24h。最后RT-PCR檢測缺氧組與對照組細(xì)胞miR-210的表達(dá)水

3、平差異。Transwell實驗分組：缺氧組，常氧對照組。其中缺氧組MCF-7細(xì)胞分別以終濃度50umol/L、100umol/L、150umol/L、200umol/L的CoCl2溶液處理24h，對照組細(xì)胞加等劑量 PBS緩沖液常規(guī)培養(yǎng)24h。以matrigel基質(zhì)膠模擬細(xì)胞外基質(zhì)，以上室細(xì)胞穿過基底膜數(shù)量作為評價指標(biāo)，觀察缺氧環(huán)境對人乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。實驗所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:

4、
　　1.RT-PCR結(jié)果顯示：不同氧含量環(huán)境下，腫瘤細(xì)胞中miR-210表達(dá)水平存在差異，對照組細(xì)胞miR-210呈較低水平表達(dá)，經(jīng)24h處理的缺氧組細(xì)胞miR-210的表達(dá)水平具有明顯的增加，其相對表達(dá)量為6.72±1.33，對照組miR-210相對表達(dá)量為1.00±0.00，二者差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　2.Transwell結(jié)果顯示：缺氧處理24h后觀察細(xì)胞，隨培養(yǎng)環(huán)境缺氧程度的增加，缺氧組細(xì)胞

5、的穿膜數(shù)與空白組相比顯著增加，細(xì)胞侵襲能力呈增強趨勢。穿過人工基底膜的細(xì)胞數(shù)量分別為168±7.50、276±9.79、320±8.66、516±9.51個/視野。各實驗組與對照組細(xì)胞穿膜數(shù)（65±2.58個/視野）比較，具有顯著差異（P＜0.01），各實驗組細(xì)胞穿膜數(shù)組內(nèi)比較，也具有顯著差異（P＜0.01）。且伴隨缺氧劑濃度的升高，細(xì)胞的侵襲程度明顯增強，各實驗組細(xì)胞的侵襲能力隨缺氧劑的加入量呈正相關(guān)性（R=0.978，P=0.000