凝血酶通過Perk1-2信號通路參與哮喘大鼠氣道重塑的研究.pdf

1、目的：
　　 哮喘是一種以可逆性氣流阻塞和氣道高反應性為特點的氣道慢性炎癥疾病。氣道重塑是其發(fā)病的一個重要病理基礎，包括腺體增生肥大、新生血管形成、上皮下纖維化、氣道平滑肌增厚等。氣道重塑可加重氣道阻塞和氣道高反應性，導致肺功能持續(xù)與進行性損害。近年來的研究表明凝血酶(Thrombin)可做為一種促氣道重塑的因子參與哮喘，pERK1/2信號通路可能是其發(fā)生作用的重要通路。本研究通過:
　　 ①用HE染色、PAS染色和馬森

2、染色比較各組大鼠氣道平滑肌增殖、杯狀細胞增生及膠原沉積的嚴重程度;
　　 ②采用ELISA檢測肺泡灌洗液的凝血酶含量;
　　 ③采用免疫組化檢測各組TGF-β1的蛋白表達情況;
　　 ④采用westernblot檢測各組pERK1/2的表達情況。
　　 探討凝血酶通過pERK1/2信號通路參與哮喘氣道重塑的作用。
　　 方法：
　　 將24只雌性大鼠隨機分為4組，正常對照組（N組）、哮喘模

3、型組（A組）、凝血酶組（T組）、凝血酶+pERK1/2抑制劑PD98059組（P組），每組6只。以卵蛋白(OVA)致敏并吸入激發(fā)制備大鼠哮喘模型。模型組于第1、8天注射卵蛋(1ml/kg)，第15天始霧化2％卵蛋白（現配）每次30分鐘，每周3次，共6周，正常對照組以生理鹽水代替。T組和P組第15天起霧化前先進行凝血酶霧化吸入72u/只，P組霧化后每只腹腔注射PD98059(3mg/kg)[1]，其他各組以生理鹽水代替。造模結束后，收集大

4、鼠肺泡灌洗液(BALF)，用ELISA測定BALF凝血酶活性。取大鼠肺組織，再分為兩部分，一部分用液氮冷凍，以備westeRNblot，另一部分將標本固定于4％多聚甲醛溶液中，以備行石蠟切片。用HE染色、PAS染色、Masson染色檢測氣道重塑情況;采用免疫組化檢測各組TGF-β1的蛋白表達情況;用westernblot觀察各組大鼠pERK1/2的表達。
　　 結果：
　　 1.一般情況:N組在激發(fā)時無煩躁不安，呼吸平穩(wěn)

5、，行動靈敏，生活習性正常，毛色有光澤;A組在激發(fā)時均出現不同程度的煩躁不安、呼吸急促、腹肌抽搐、大小便失禁等癥狀，嚴重者呼吸減慢或節(jié)律不齊，行動遲緩或俯伏不動。經過多次激發(fā)后，哮喘組上述癥狀反而有所減輕，毛色無光澤;T組大鼠呈現于A組一致的癥狀，但程度均重于A組;P組在激發(fā)時出現煩躁不安現象較輕，呼吸增快，偶爾出現大小便失禁狀況，無呼吸減慢或節(jié)律不齊，行動遲緩或俯伏不動現象，毛色正常。
　　 2.氣道重塑情況:N組平滑肌無增厚，

6、無杯狀細胞增生和膠原纖維沉積;A組平滑肌異常增厚，杯狀細胞增生多，膠原纖維沉積明顯;T組平滑肌增生、杯狀細胞增生及膠原纖維沉積情況最嚴重;P組平滑肌增生程度較輕，杯狀細胞少，膠原纖維有沉積，但較A組明顯減輕。
　　 3.凝血酶測定結果:N組凝血酶含量最少，A組凝血酶含量增高，T組最高，說明給藥成功，P組活性與T組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05).
　　 4.TGF-β1的表達:N組表達水平很低，A組表達水平很高，與N組相

7、比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，T組表達水平最高，與A組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，P組的表達水平明顯降低，與T組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 5.pERK1/2的表達:N組表達水平很低，A組表達水平很高，與N組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，T組表達水平最高，與A組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，P組的表達水平明顯降低，與A和T組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1.