內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在去天門冬氨酸血管緊張素Ⅰ減輕心肌微血管內(nèi)皮細胞缺血-再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的：
　　心肌缺血/再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，I/RI）可加重急性心肌梗死患者心臟的損傷。缺血/再灌注損傷發(fā)生時，缺氧、鈣超載、自由基增多等多種因素，可誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（endoplasmic reticulum stress，ERS)。以往研究證實內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是心肌缺血/再灌注損傷的重要機制之一，抑制過度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可減輕心肌的損傷，被認為是一種潛在的治療靶點。
　　去天門冬氨酸血管

2、緊張素Ⅰ（des-aspartate-angiotensinⅠ，DAA-Ⅰ）是一種有生物學活性的內(nèi)源性肽，可對抗血管緊張素Ⅱ的病理生理學作用，通過抑制炎癥反應，可減輕心肌的缺血/再灌注損傷。我們前期研究證實，DA A-Ⅰ對缺血/再灌注過程中的心肌微血管內(nèi)皮細胞有保護作用，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激參與其中，但其具體分子機制尚不清楚。本研究將對其可能的分子機制進行探討，為其臨床應用實驗室依據(jù)。
　　方法：
　　1.分離和培養(yǎng)大鼠的心肌微血管內(nèi)

3、皮細胞，建立模擬缺血/再灌注損傷的細胞模型。進行隨機化分組，實驗分為對照組、模擬缺血/再灌注損傷組（SI/R組）、模擬缺血/再灌注損傷+4-苯基丁酸鈉（4-PBA，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑）組、模擬缺血/再灌注損傷+ DAA-I組、模擬缺血/再灌注損傷+ DAA-I+Compound C（AMPK特異性抑制劑）組。
　　2.用MTT法檢測細胞增值能力，用TUNEL法檢測細胞凋亡。
　　3.采用Western blot法檢測GRP78

4、、CHOP、AMPK蛋白表達和磷酸化水平。
　　結(jié)果：
　　1.成功地進行了心肌微血管內(nèi)皮細胞的分離及培養(yǎng)，并建立起模擬缺血/再灌注損傷的細胞模型。
　　2.模擬缺血/再灌注損傷對細胞增殖能力和凋亡的影響。SI/R組的細胞增值能力比對照組的明顯下降（P<0.05），細胞凋亡率明顯增加（4.02％±0.85%比26.21%±2.97%，P<0.05）。與SI/R組比較，SI/R+4-PBA組 CMECs細胞增值能力明顯升

5、高（P<0.05），SI/R+DAA-I組CMECs凋亡率明顯降低（26.21%±2.97%比16.18%±2.93%，P<0.05），而SI/R+DAA-I+Compound C組CMECs凋亡率略微降低，但仍具有統(tǒng)計學意義（26.21%±2.97%比21.68%±3.37%，P>0.05）。
　　3.模擬缺血/再灌注損傷對GRP78、CHOP、AMPK蛋白表達和磷酸化水平的影響。SI/R組GRP78、CHOP蛋白表達比對照組明

6、顯升高（P<0.05），p-AMPK稍升高。與SI/R組比較，SI/R+4-PBA組 GRP78、CHOP蛋白表達明顯降低（P<0.05）；SI/R+ DAA-I組GRP78、CHOP蛋白表達明顯降低（P<0.05），p-AMPK明顯升高（P<0.05）；SI/R+DAA-I+Compound C組GRP78、CHOP蛋白表達輕度降低（P<0.05），p-AMPK水平升高（P<0.05），但低于SI/R+DAA-I組（P<0.05）。<