2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景及目的:
   皮膚作為一種特殊的器官,是人類與外界接觸的第一道屏障,它是機體免于脫水、損傷、感染的第一道防線,是維持內環(huán)境穩(wěn)定和阻止微生物、化學物質等侵入的屏障[1,2,3]。皮膚創(chuàng)傷愈合較為復雜,盡早修復缺損皮膚并最大可能恢復功能與外觀已成為治療重要目標,促進皮膚創(chuàng)傷愈合具有重要的理論和實際意義[4,5]。傳統修復方法有:自體植皮、同種異體植皮、異種植皮和人工合成皮膚產品的應用[6]。但無論同體或異體皮移植均受到供體來源

2、的限制,異體皮和人工合成皮膚代用品的移植還受到發(fā)生免疫排斥反應的困擾[7,8],尋找一種理想的皮膚替代物一直是臨床上一個亟待解決的難題。
   人羊膜(HAM)是一種天然高分子生物材料,含膠原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板層體等多種成分,它表達多種生長因子及其mRNA的相關蛋白,有利于細胞的生長繁殖,可促進上皮形成,抑制炎癥和新生血管形成,還可以抑制纖維化減少瘢痕形成,并可作為細胞移行生長的良好支架,有利于組織修復[9]。人羊膜

3、間充質干細胞(hAMSCs),具有高度自我更新能力和多向分化潛能,易在體外培養(yǎng),并能大量擴增,有遺傳性狀穩(wěn)定,增殖能力強,低免疫原性等生物學特性,并能產生大量生長因子[10,11]。
   本實驗將HAM負載hAMSCs,覆蓋于SD大鼠皮膚創(chuàng)面,觀察它們對創(chuàng)面愈合的作用,同時檢測各組中皮膚CK19陽性細胞的分布和血管上皮生長因子(VEGF)表達,判斷表皮干細胞和血管生成情況。
   方法:
   1、原代分離培養(yǎng)

4、hAMSCs:將新鮮羊膜用PBS液反復清洗,采用胰蛋白酶-膠原酶聯合消化法分離人羊膜間充質干細胞,使用含10%FBS DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)人羊膜間充質干細胞。
   2、hAMSCs的鑒定:采用免疫細胞化學和流式細胞術分析其表型特征。
   3、羊膜負載hAMSCs:羊膜用胰酶消化去上皮細胞,細胞以1.54×105/cm2密度種于羊膜上,加入DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)。
   4、建立大鼠全層皮膚創(chuàng)傷模型:

5、在大鼠背部做2cm×2cm創(chuàng)面,形全層皮膚缺損,創(chuàng)面隨機分為三組:對照組、羊膜組、羊膜負載hAMSCs組。
   5、免疫組化染色:用免疫組織化學染色法觀察各組大鼠皮膚修復中CK19陽性細胞的分布和VEGF表達情況。
   6、統計學分析:實驗所得數據以(x±s)表示,用t檢驗比較組間差異,用SPSS11.5軟件進行方差分析,P<0.05為差異有統計學意義。
   實驗結果:
   1、從羊膜中成功分離出

6、hAMSCs原代細胞,經過24h體外培養(yǎng)后有少量貼壁細胞,6d后貼壁細胞迅速增多,培養(yǎng)至第14d,細胞融合,形態(tài)比較均一,呈放射狀或漩渦狀分布。傳代后hAMCs增殖迅速,保持良好的增殖能力;傳至8代以后,細胞增殖減緩。
   2、hAMSCs表達間充質細胞標志物波形蛋白、CD90、CD44,不表達CD105、CD45。
   3、人羊膜負載hAMSCs組傷口愈合速度明顯快于羊膜組和對照組(P<0.05);皮膚切片HE染色

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