心肌細胞中核轉(zhuǎn)錄因子E47與α-平滑肌肌動蛋白的關系初探.pdf

1、核轉(zhuǎn)錄因子E47是E2A基因編碼的兩個不同堿性螺旋環(huán)（basic Helix-Loop-Helix，bHLH）轉(zhuǎn)錄因子（E12和E47）之一，亦稱Transcription Factor-3（TCF-3）。E47通過形成同源或異源二聚體，結合于目的基因上游啟動子的順式作用元件E-box而調(diào)節(jié)基因表達。課題組前期利用轉(zhuǎn)錄因子活性譜芯片發(fā)現(xiàn)，原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞缺氧/復氧（hypoxia reperfusion，H/R）后可引起核轉(zhuǎn)錄

2、因子E47活性明顯上調(diào)。文獻報道，E47通過與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)型（epithelial mesenchymal transition，EMT）密切相關的兩個基因——鈣黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌動蛋白（αsmooth muscle actin,α-SMA）的上游啟動子的E-box順式作用元件結合，上調(diào)α-SMA的表達，并下調(diào)E-cadherin的表達，促使上皮細胞表型發(fā)生變化，而失去上皮細胞特征和獲得肌纖維母細胞樣表性。為此，

3、E47在心肌細胞H/R過程中活性增高，是否也會誘導心肌細胞中α-SMA的表達變化，使心肌細胞獲得肌纖維母細胞樣表型呢？
　　目的：
　　初步探討心肌細胞缺氧復氧后核轉(zhuǎn)錄因子E47與α-SMA的關系。
　　方法：
　　1.采用差速貼壁法體外培養(yǎng)Sprague-Dawly大鼠新生乳鼠原代心肌細胞及H9c2大鼠心肌細胞株。
　　2. Real-time PCR檢測心肌細胞缺氧/復氧（H/R）后E47和α-SMA

4、mRNA的表達水平的變化。
　　3. Western-blot測定心肌細胞缺氧/復氧（H/R）后E47、α-SMA的蛋白表達水平的變化。
　　4.免疫熒光法觀察H/R前后E47和α-SMA在細胞中的表達定位及變化。
　　5.利用電泳遷移率實驗（Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA）在E47表達最高時間點檢測其與α-SMA啟動子E-box序列的結合活性。
　　結果：

5、r>　　1. E47蛋白及mRNA的表達水平在原代心肌細胞和H9c2細胞 H/R后均出現(xiàn)表達增高現(xiàn)象，以H3h/R2h時間點表達最高，此后隨著復氧時間的延長E47表達逐漸降低。
　　2.α-SMA蛋白及mRNA的表達水平在原代心肌細胞和H9c2細胞 H/R后均未出現(xiàn)明顯變化。
　　3.免疫熒光結果顯示，E47在細胞質(zhì)和核內(nèi)均有表達，H3h/R2h后在細胞質(zhì)及核內(nèi)的表均有所上升；而α-SMA則主要在細胞質(zhì)中表達，且H3h/R2