NRG-1調(diào)節(jié)α-肌動蛋白表達(dá)及平滑肌細(xì)胞收縮功能的分子機(jī)制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在成年的血管中,血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth musclecells,VSMCs)的主要功能是通過收縮來調(diào)節(jié)血管的張力和直徑,進(jìn)而調(diào)節(jié)由血壓和血液的分布。VSMCs存在增殖型和收縮型兩種表型。收縮型VSMCs可以表達(dá)多種平滑肌分化標(biāo)志基因,例如α-肌動蛋白(smooth muscleα-actin,α-SMA)、肌球蛋白重鏈(SM-myosin heavy chain,MHC)、平滑肌蛋白22-α(smooth mus

2、cle protein22-α,SM22α)。血清反應(yīng)因子(serum response factor,SRF)通過募集myocardin、MRTF-A/B等輔助因子來調(diào)控平滑肌標(biāo)志基因的的表達(dá)。已經(jīng)證明,轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)是調(diào)節(jié)平滑肌標(biāo)志基因表達(dá)的重要細(xì)胞因子。
  神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(neuregulin-1,NRG-1)是含有表皮生長因子(epidermal

3、 growth factor,EGF)樣結(jié)構(gòu)域的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白家族成員之一,由NRG基因通過選擇性地拼接所產(chǎn)生。NRG-1蛋白含有EGF樣的胞外結(jié)構(gòu)域和高度保守的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(intracellular domain,NRG-1-ICD)。NRG-1被基質(zhì)金屬蛋白酶水解后釋放出具有生物活性的可溶性 EGF片段,而NRG-1-ICD進(jìn)入細(xì)胞核,通過與一些轉(zhuǎn)錄因子相互作用而調(diào)節(jié)基因表達(dá)。此外,NRG-1-ICD含有的LIM結(jié)構(gòu)域可以與和胞漿蛋白

4、相互作用。許多研究表明,NRG-1在心血管生理及病理過程中都發(fā)揮重要作用。首先,NRG-1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),而它的受體位于毗鄰的平滑肌細(xì)胞上。其次,在VSMCs中,NRG-1可以抑制由血小板源性生長因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)引起的細(xì)胞增殖和遷移。再次,NRG-1可以調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞功能和參與對血流動力學(xué)穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)。但是,TGF-β1誘導(dǎo)的VSMC分化是否需要 NRG-1

5、-ICD參與以及NRG-1-ICD如何調(diào)節(jié)VSMCs的功能目前尚無報道。
  環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)是最近被發(fā)現(xiàn)的對真核基因表達(dá)具有調(diào)節(jié)功能的非編碼RNA。circRNA可以作為微小RNA(microRNA,miRNA)的“海綿”競爭性結(jié)合胞內(nèi) miRNA,阻斷miRNA對其靶基因的抑制作用,從而上調(diào)miRNA靶基因的表達(dá)。除此以外,circRNA也可通過與RNA結(jié)合蛋白(RNA-binding p

6、rotein,RBP)結(jié)合,或者與其他RNA通過堿基互補結(jié)合而對特定基因發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。已經(jīng)證明,在血管組織中,circRNA cZNF292可以通過調(diào)節(jié)E2FI、NF-kB、Sp1、Ap1等轉(zhuǎn)錄因子的活性而調(diào)節(jié)血管的生成。在人的動脈粥樣硬化斑塊中,circANRIL在VSMCs和巨噬細(xì)胞中都有表達(dá),其通過調(diào)節(jié)核糖體的合成而發(fā)揮抗動脈粥樣硬化作用。然而在 VSMCs中是否存在circRNAs及 circRNAs對VSMCs的調(diào)節(jié)功能尚不清

7、楚。因此,本研究以TGF-β1作為VSMC分化的誘導(dǎo)因素,探索NRG-1-ICD和circRNA對VSMC功能的調(diào)節(jié)及作用機(jī)制。
  第一部分:TGF-β1誘導(dǎo)合成的NRG-1-ICD參與VSMC細(xì)胞骨架的組構(gòu)
  目的:
  探討NRG-1是否在VSMC中進(jìn)行表達(dá)以及NRG-1-ICD在VSMC中的作用。
  方法:
  1.免疫熒光檢查NRG-1在小鼠血管組織中的表達(dá),Western blot和RT-P

8、CR檢測NRG-1在不同種屬VSMC中的表達(dá)。
  2.在VSMC中過表達(dá)NRG-1后,鬼筆環(huán)肽染色觀察細(xì)胞骨架及肌絲的變化。
  3.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察NRG-1過表達(dá)對乙酰膽堿誘導(dǎo)的細(xì)胞收縮的影響。
  4.細(xì)胞免疫熒光檢測NRG-1-ICD和α-SMA的共定位。
  5.免疫共沉淀檢測NRG-1、NRG-1-ICD與α-SMA的相互作用。
  6.GST pull-down在體外驗證NRG-1/NRG-1

9、-ICD與α-SMA的相互作用。
  7.PLA實驗在體內(nèi)觀察NRG-1與α-SMA的作用。
  結(jié)果:
  1.在人主動脈血管平滑肌細(xì)胞(human artery smooth muscle cell,HASMC)中,TGF-β1上調(diào)NRG-1的表達(dá)
  為了確定NRG-1是否在VSMC中表達(dá),我們用NRG-1抗體對野生型C57BL/6小鼠的主動脈血管進(jìn)行免疫熒光染色。結(jié)果顯示,NRG-1與平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志蛋白

10、α-SMA共定位。Western blot和RT-PCR結(jié)果顯示, NRG-1的mRNA和蛋白在大鼠VSMC,HASMC以及人血管內(nèi)皮細(xì)胞中都有表達(dá)。
  已知TGF-β1和PDGF-BB調(diào)節(jié)VSMC標(biāo)志基因的表達(dá),但它們是否影響NRG-1的表達(dá)目前尚不清楚。分別用10 ng/mL的PDGF-BB和2 ng/mL的TGF-β1刺激細(xì)胞不同時間(0、6、12、24 h)。提取總RNA和總蛋白進(jìn)行Real-time PCR和Weste

11、rn blot分析。結(jié)果顯示,隨著PDGF-BB刺激時間的延長,NRG-1的表達(dá)逐漸降低。相反,隨著TGF-β1刺激時間的延長,NRG-1的表達(dá)逐漸增加。
  2.NRG-1-ICD參與細(xì)胞骨架的組構(gòu)
  為了研究NRG-1在VSMC中的作用,用攜帶NRG-1基因的腺病毒感染細(xì)胞24 h后,觀察細(xì)胞骨架的變化。鬼筆環(huán)肽染色結(jié)果顯示,過表達(dá)NRG-1可以促進(jìn)肌絲成束,使應(yīng)力纖維增粗。
  因為NRG-1含有EGF樣的胞外

12、結(jié)構(gòu)域(ECD)和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(ICD),我們進(jìn)一步檢查NRG-1的哪個結(jié)構(gòu)域?qū)?xì)胞骨架發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),用HRG-β1(可溶性活性成分)處理細(xì)胞時,細(xì)胞骨架不發(fā)生明顯的變化。然而,過表達(dá)NRG-1-ICD后,細(xì)胞骨架出現(xiàn)束狀排列。這些結(jié)果表明,NRG-1對細(xì)胞骨架的組構(gòu)主要是通過NRG-1-ICD實現(xiàn)的。我們還發(fā)現(xiàn),過表達(dá)NRG-1可以促進(jìn)乙酰膽堿誘導(dǎo)的細(xì)胞收縮
  3.TGF-β1促進(jìn)NRG-1/NRG-1-ICD與α-S

13、MA的相互作用
  為了進(jìn)一步檢查NRG-1-ICD參與細(xì)胞骨架的組構(gòu)是否和其與α-SMA相互作用有關(guān),我們用檢測蛋白質(zhì)相互作用的實驗檢查二者的結(jié)合。細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示,在未經(jīng)TGF-β1處理的HASMC中,NRG-1-ICD和α-SMA表達(dá)水平較低。TGF-β1刺激12 h后,二者的表達(dá)明顯增加,而且二者在細(xì)胞漿中共定位。從被TGF-β1刺激后的HASMC中提取蛋白質(zhì),經(jīng)抗α-SMA抗體免疫沉淀后,用抗NRG-1和抗NRG-1

14、-ICD的抗體進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果顯示,在基礎(chǔ)水平時,NRG-1/NRG-1-ICD均與α-SMA結(jié)合,TGF-β1刺激12 h后,二者之間的結(jié)合明顯增加。GST pull-down實驗進(jìn)一步證實,在TGF-β1可以直接增強NRG-1/NRG-1-ICD與α-SMA的相互作用,與免疫共沉淀的結(jié)果相一致。PLA實驗結(jié)果也顯示,NRG-1與α-SMA存在相互作用。這些結(jié)果表明,NRG-1-ICD通過與α-SMA的相互作用而

15、調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的組構(gòu)。
  小結(jié):
  綜上所述,TGF-β1可在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上上調(diào)NRG-1表達(dá);NRG-1的ICD結(jié)構(gòu)域通過與α-SMA相互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架組構(gòu),參與細(xì)胞收縮;TGF-β1促進(jìn)NRG-1/NRG-1-ICD與α-SMA的相互作用。
  第二部分:circACTA2介導(dǎo)NRG-1-ICD對α-SMA表達(dá)的調(diào)節(jié)
  目的:
  揭示NRG-1-ICD調(diào)節(jié)α-SMA表達(dá)的作用機(jī)制。
  

16、方法:
  1.細(xì)胞免疫熒光檢測NRG-1-ICD的細(xì)胞定位。
  2.ChIP法檢測NRG-1-ICD在α-SMA基因第一內(nèi)含子上的富集。
  3.熒光素酶報告基因分析鑒定NRG-1-ICD在α-SMA基因第一內(nèi)含子上的結(jié)合位點。
  4.分別在 HASMC中過表達(dá)或敲低NRG-1-ICD,Western blot檢測α-SMA的表達(dá)變化。
  5.qRT-PCR檢測過表達(dá)NRG-1-ICD后α-SMA

17、mRNA表達(dá)變化。
  6.RT-PCR和RNaseR處理后,qRT-PCR檢測線性和環(huán)狀RNA。
  7.CRISPRi封閉NRG-1-ICD結(jié)合位點,qRT-PCR檢測circACTA2和α-SMA mRNA的變化。
  8.過表達(dá) NRG-1-ICD后再給與TGF-β1刺激,qRT-PCR檢測circACTA2的表達(dá)。
  9.Western blot檢測過表達(dá)或敲低circACTA2對α-SMA表達(dá)的影響

18、。
  結(jié)果:
  1.在HASMC中,NRG-1-ICD上調(diào)α-SMA的表達(dá)
  細(xì)胞免疫熒光染色顯示,在靜止的HASMC中,NRG-1-ICD在胞漿和胞核均有分布,但以胞漿居多。TGF-β1刺激12 h后,NRG-1-ICD在胞漿和胞核中都增多,胞核中增加更為明顯。為了確定NRG-1-ICD的作用位點,我們進(jìn)行了Chromatin Immunoprecipitation Sequencing(ChIP-Seq)分析

19、。在TGF-β1刺激細(xì)胞12 h后,用NRG-1-ICD抗體沉淀染色質(zhì)片段。高通量測序與數(shù)據(jù)分析的結(jié)果顯示,TGF-β1刺激后,α-SMA基因第一內(nèi)含子(+5642 bp/+5787 bp區(qū)域)的DNA片段被NRG-1-ICD抗體所沉淀。我們進(jìn)一步用ChIP-qPCR實驗對ChIP-Seq結(jié)果進(jìn)行驗證,發(fā)現(xiàn)TGF-β1刺激后,NRG-1-ICD與α-SMA基因第一內(nèi)含子+5642 bp/+5787 bp的相互作用增強。構(gòu)建NRG-1-I

20、CD-binding site和NRG-1-ICD-binding site mut熒光素酶報告基因載體,與NRG-1-ICD表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞后,觀察NRG-1-ICD過表達(dá)對報告基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,過表達(dá)NRG-1-ICD后,野生型NRG-1-ICD-binding site指導(dǎo)報告基因表達(dá)的活性明顯升高,但是突變位點對熒光素酶表達(dá)沒有明顯影響。這些結(jié)果說明,NRG-1-ICD通過與α-SMA基因第一內(nèi)含子區(qū)+5642

21、 bp/+5787 bp的相互作用上調(diào)α-SMA表達(dá)。
  為了進(jìn)一步明確NRG-1-ICD在TGF-β1促進(jìn)α-SMA表達(dá)中的作用,我們用攜帶NRG-1-ICD基因的腺病毒感染細(xì)胞后,再給予TGF-β1刺激24 h,觀察α-SMA的表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示,TGF-β1可以誘導(dǎo)α-SMA的表達(dá),NRG-1-ICD過表達(dá)可進(jìn)一步增加α-SMA的表達(dá)水平。利用靶向NRG-1-ICD的siRNA轉(zhuǎn)染HASMC24 h,檢

22、測TGF-β1對α-SMA的影響。結(jié)果顯示,敲低NRG-1-ICD后,α-SMA表達(dá)水平明顯降低,即使再給予TGF-β1處理仍不能恢復(fù)α-SMA的表達(dá)水平。此外,我們還發(fā)現(xiàn),過表達(dá)NRG-1-ICD不影響α-SMA mRNA水平。
  2.NRG-1-ICD誘導(dǎo)circACTA2的形成
  上述實驗結(jié)果表明,NRG-1可以上調(diào)α-SMA的蛋白水平,但不影響其mRNA。由此,我們推測,NRG-1可能在轉(zhuǎn)錄后水平上通過miRNA

23、或者是circRNA對α-SMA表達(dá)起調(diào)控作用。為了驗證這個假說,我們設(shè)計針對circACTA2反向連接處的引物,以互補DNA(cDNA)和基因組DNA(gDNA)為模板進(jìn)行RT-PCR。結(jié)果顯示,以cDNA為模板可以擴(kuò)增出circACTA2連接處的DNA片段,而以gDNA為模板卻不能擴(kuò)增出此片段。由于circRNA的環(huán)狀結(jié)構(gòu)對核糖核酸酶R(RNase R)不敏感,線性RNA則不然,所以利用RNase R處理可以區(qū)別circRNA與線性

24、RNA。結(jié)果發(fā)現(xiàn),RNase R處理使線性ACTA2(α-SMA mRNA)降低90%,而circACTA2只降低40%。我們用針對全長circACTA2的引物進(jìn)行RT-PCR,結(jié)果顯示,全長 circACTA2的長度約為730 bp。這些結(jié)果說明,HASMC中存在circACTA2。
  為了研究NRG-1-ICD是否可以影響 circACTA2的形成,我們用CRISPR interference(CRISPRi)封閉技術(shù),即用

25、dCas9+gRNA阻斷RNA聚合酶II與NRG-1-ICD結(jié)合位點結(jié)合后,觀察circACTA2表達(dá)變化。合成一段與NRG-1-ICD結(jié)合位點互補的單鏈gRNA,它通過介導(dǎo)Cas9酶與α-SMA基因第一內(nèi)含子結(jié)合而阻斷轉(zhuǎn)錄的起始及延伸。qRT-PCR結(jié)果顯示,封閉NRG-1-ICD結(jié)合位點后circACTA2表達(dá)降低,而α-SMA mRNA沒有變化。并且我們還發(fā)現(xiàn),單獨給予TGF-β1刺激或者過表達(dá)NRG-1-ICD均可以使circA

26、CTA2的表達(dá)增高,同時給予二者時,會進(jìn)一步增加circACTA2的表達(dá)水平。
  3.circACTA2介導(dǎo)TGF-β1對α-SMA表達(dá)的誘導(dǎo)作用
  我們設(shè)計兩個siRNA,一個特異性敲低circACTA2(si-circACTA2),另一個是同時敲低環(huán)狀和線狀A(yù)CTA2(si-both)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),單獨敲低circACTA2不影響α-SMA mRNA水平;同時敲低環(huán)狀和線狀RNA時,會使circACTA2和α-SMA

27、mRNA的水平均下降。Western blot結(jié)果顯示,過表達(dá)或者敲低circACTA2分別增加或降低α-SMA蛋白水平。為了進(jìn)一步驗證circACTA2是否介導(dǎo)TGF-β1對α-SMA蛋白表達(dá)的影響,我們過表達(dá) circACTA2后再給予TGF-β1處理,結(jié)果發(fā)現(xiàn),過表達(dá) circACTA2可以進(jìn)一步增強TGF-β1對α-SMA表達(dá)的上調(diào)作用。反之,敲低circACTA2則降低TGF-β1對α-SMA表達(dá)的誘導(dǎo)。
  小結(jié):

28、r>  綜上所述,circACTA2介導(dǎo)TGF-β1和NRG-1-ICD對α-SMA表達(dá)的調(diào)節(jié)。
  第三部分:circACTA2通過吸附miR-548f-5p上調(diào)α-SMA表達(dá)及調(diào)節(jié)HASMC功能
  目的:
  揭示circACTA2調(diào)節(jié)α-SMA表達(dá)及VSMC功能的分子機(jī)制。
  方法:
  1.構(gòu)建帶有熒光素酶活性的野生型 pmirGLO-circACTA2和突變型pmirGLO-circACTA2

29、 mut質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞后進(jìn)行雙熒光素報告基因分析。
  2.生物素標(biāo)記 circACTA2和miR-548f-5p,經(jīng)oligo-pull down和qRT-PCR檢測被富集的miR-548f-5p和circACTA2。
  3.原位雜交檢查miR-548f-5p和circACTA2在細(xì)胞中的共定位。
  4.合成α-SMA3’UTR及其突變體DNA片段,克隆進(jìn)pmir-GLO載體質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞后進(jìn)行報

30、告基因分析。
  5.過表達(dá)或敲低miR-548f-5p, Western blot觀察α-SMA蛋白的表達(dá)水平。
  6.分別過表達(dá)NRG-1-ICD敲低circACTA2或miR-548f-5p后,western blot檢測α-SMA蛋白的表達(dá)。
  7.觀察NRG-1-ICD、circACTA2、miR-548f-5p對乙酰膽堿誘導(dǎo)的細(xì)胞收縮的影響。
  結(jié)果:
  1.circACTA2作為分子“

31、海綿”吸附miR-548f-5p
  用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測circACTA2上 microRNA的結(jié)合位點,發(fā)現(xiàn)circACTA2上存在1個miR-548f-5p的潛在結(jié)合位點,暗示circACTA2可能與miR-548f-5p相互作用。我們構(gòu)建帶有熒光素酶基因的野生型pmirGLO-circACTA2和突變型pmirGLO-circACTA2 mut質(zhì)粒,將其與miR-548f-5p模擬物共轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞。報告基因分析結(jié)果顯示

32、,野生型pmirGLO-circACTA2指導(dǎo)的熒光素酶活性能被miR-548f-5p模擬物所抑制,但miR-548f-5p模擬物對突變型pmirGLO-circACTA2 mut指導(dǎo)的熒光素酶活性沒有影響。
  用生物素標(biāo)記的circACTA2對RNA提取物進(jìn)行 oligo-pull down,qRT-PCR分析其富集的miRNAs。結(jié)果顯示,與對照探針組相比,circACTA2探針組的miR-548f-5p富集量明顯增加。反之

33、,用標(biāo)記生物素的miR-548f-5p作為探針,經(jīng) oligo-pull down和 qRT-PCR分析被miR-548f-5p富集的circRNAs。結(jié)果表明,與對照探針組相比,miR-548f-5p探針組的circACTA2富集量也有所增加。原位雜交實驗也證實circACTA2在細(xì)胞內(nèi)與miR-548f-5p共定位。此外,TGF-β1刺激和NRG-1-ICD過表達(dá)都可以使miR-548f-5p的表達(dá)水平降低,二者聯(lián)合時降低更為顯著。

34、這些結(jié)果表明,circACTA2可以作為分子“海綿”吸附miR-548f-5p。
  2.在VSMC中,miR-548f-5p通過靶向α-SMA3’UTR而抑制其蛋白表達(dá)
  我們發(fā)現(xiàn),α-SMA3’非編碼區(qū)(UTR序列)含有miR-548f-5p的結(jié)合位點。將含有miR-548f-5p結(jié)合位點的α-SMA及其突變體3’UTR克隆到攜帶熒光素酶基因的pmir-GLO質(zhì)粒上,轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞后進(jìn)行熒光素酶活性分析。結(jié)果顯示,含

35、有野生型miR-548f-5p結(jié)合位點的報告基因的表達(dá)活性能被miR-548f-5p模擬物所抑制,而其突變體不能被模擬物所抑制。分別用 miR-548f-5p的模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染HASMC,qRT-PCR證實miR-548f-5p在細(xì)胞中得到過表達(dá)和敲低。Western blot結(jié)果顯示, miR-548f-5p mimic能使α-SMA蛋白表達(dá)水平顯著降低,而anti-miR-548f-5p對α-SMA蛋白表達(dá)影響不大。以上結(jié)果表明,

36、在HASMC中,miR-548f-5p通過直接與α-SMA3'UTR結(jié)合來抑制其蛋白的表達(dá)。
  3.NRG-1/circACTA2/miR-548f-5p形成調(diào)節(jié)軸共同調(diào)節(jié)VSMC的收縮功能
  在HASMC中,用siRNA靶向敲低circACTA2后再用腺病毒過表達(dá)NRG-1-ICD,檢查其對α-SMA表達(dá)的影響。結(jié)果表明,敲低circACTA2能顯著抑制 NRG-1-ICD過表達(dá)對α-SMA表達(dá)的上調(diào)。相反,過表達(dá)ci

37、rcACTA2則進(jìn)一步增加NRG-1-ICD過表達(dá)對α-SMA表達(dá)的上調(diào)。這些結(jié)果表明,circACTA2介導(dǎo)NRG-1-ICD對α-SMA表達(dá)的上調(diào)作用。共表達(dá)circACTA2和NRG-1-ICD可以顯著增加乙酰膽堿誘導(dǎo)的細(xì)胞收縮。
  我們進(jìn)一步用miR-548f-5p的抑制物和靶向circACTA2的siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞,檢查其對α-SMA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,用 anti-miR-548f-5p拮抗miR-548f-5p的

38、作用后,α-SMA蛋白表達(dá)水平明顯增加。然而,敲低circACTA2則明顯抑制α-SMA的表達(dá)。相反,circACTA2過表達(dá)增加α-SMA的表達(dá),并且過表達(dá)circACTA2和抑制miR-548f-5p可進(jìn)一步增加α-SMA的表達(dá)水平。這些結(jié)果表明,circACTA2可以作為分子“海綿”吸附miR-548f-5p,解除其對靶基因α-SMA的抑制。我們還發(fā)現(xiàn),過表達(dá)circACTA2和抑制miR-548f-5p可以增加乙酰膽堿誘導(dǎo)的細(xì)胞

39、收縮。這些結(jié)果提示,NRG-1、circACTA2和miR-548f-5p形成調(diào)節(jié)軸共同對α-SMA表達(dá)和VSMC功能發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。
  小結(jié):
  circACTA2作為分子“海綿”吸附miR-548f-5p,解除其對靶基因α-SMA的抑制作用;NRG-1、circACTA2和 miR-548f-5p形成調(diào)節(jié)軸共同調(diào)節(jié)α-SMA表達(dá)及VSMC的收縮功能。
  結(jié)論:
  1.TGF-β1可在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上上調(diào)

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