成年神經(jīng)細(xì)胞再生對于不同程度海馬創(chuàng)傷后認(rèn)知功能修復(fù)作用的研究.pdf

1、目的:神經(jīng)科學(xué)研究人員從多個方面研究成年內(nèi)源性神經(jīng)細(xì)胞再生(AdultNeurogenesis)對于腦創(chuàng)傷的修復(fù)作用,然而針對不同程度腦創(chuàng)傷的分類對照研究仍然很少。本實驗通過檢測不同程度海馬創(chuàng)傷后神經(jīng)前體細(xì)胞的再生情況以及海馬空間學(xué)習(xí)和記憶能力的修復(fù)狀況,評價在沒有外界因素干預(yù)的情況下,內(nèi)源性神經(jīng)細(xì)胞再生對于腦創(chuàng)傷修復(fù)的意義。
　　 方法:按照完全隨機化原則,成年Wistar大鼠49只分為輕度損傷組(n=17)、重度損傷組(n=

2、17)和對照組(n=15)。輕度損傷組和重度損傷組分別給予1.8±0.02atm和2.8±0.04 atm液壓打擊制作成腦創(chuàng)傷模型。對照組只進行手術(shù)操作,不給予液壓打擊。所有大鼠傷后連續(xù)6天以200mg/kg的劑量腹腔注射BrdU標(biāo)記新生細(xì)胞。傷后24小時,選取輕度損傷組和重度損傷組各3只大鼠進行腦組織HE染色以檢測模型制作成功。傷后7天,每組各5只大鼠取腦并進行BrdU免疫熒光染色觀察海馬新生細(xì)胞的增殖情況。選取傷后8-12天、29-

3、33天和57-61天3個時間點對剩余的28只大鼠進行Morrs水迷宮檢測以評價認(rèn)知功能狀況。每個時間點連續(xù)檢測5天,以逃避潛伏期作為檢測海馬功能的主要參數(shù),取每個時間點最后一天的成績作來評價海馬功能。傷后61天,剩余28只大鼠取腦并進行BrdU聯(lián)合NeuN免疫熒光染色觀察海馬新生細(xì)胞的存活和分化情況。規(guī)律選擇鼠腦切片對海馬的新生細(xì)胞進行計數(shù),評價不同程度腦創(chuàng)傷后海馬的新生細(xì)胞狀況。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)胞增殖情況比

4、較:傷后7天,海馬齒狀回BrdU+細(xì)胞計數(shù),輕度損傷組(5710±779)較對照組(1177±108)明顯增多,重度損傷組(2146±492)較對照組(1177±108)亦增多；不同損傷組之間比較,輕度損傷組(5710±779)較重度損傷組(2146±492)的BrdU+細(xì)胞明顯增多,輕度損傷后細(xì)胞增殖最活躍。
　　 2.細(xì)胞存活情況比較:傷后61天,海馬齒狀回BrdU+/NeuN+細(xì)胞計數(shù),輕度損傷組(1830±411)較對照

5、組(817±171)明顯增多,重度損傷組(640±176)較對照組(817±171)無明顯差異,輕度損傷組(1830±411)較重度損傷組(640±176)明顯增多,輕度損傷后成熟神經(jīng)細(xì)胞存活最多。計算傷后存活成熟神經(jīng)細(xì)胞占同時期存活細(xì)胞的比例,對照組(83±6％)較輕度損傷組(71±6％)和重度損傷組(64±9％)有更高比例的新生細(xì)胞分化為成熟神經(jīng)細(xì)胞。
　　 3.海馬認(rèn)知功能比較:傷后12天和傷后33天,輕度損傷組和重度損傷

6、組較對照組表現(xiàn)出明顯的認(rèn)知功能障礙。傷后61天,輕度損傷組的認(rèn)知功能恢復(fù)到對照組水平,然而重度損傷依然存在認(rèn)知功能障礙。
　　 結(jié)論:成年海馬存在自身修復(fù)機制,創(chuàng)傷性顱腦損傷對于成年海馬的神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖可能是一個促進因素。創(chuàng)傷后一大部分新生細(xì)胞能夠存活并且主要分化為成熟的神經(jīng)細(xì)胞,提示腦創(chuàng)傷后神經(jīng)起源區(qū)域的細(xì)胞增殖和分化的結(jié)果以神經(jīng)細(xì)胞再生為主,可能還伴有其它類型的細(xì)胞生成,如膠質(zhì)細(xì)胞的生成。本研究發(fā)現(xiàn),嚴(yán)重的顱腦創(chuàng)傷并沒有