條件性恐懼消除過程中海馬神經(jīng)細(xì)胞再生的研究.pdf

1、前言
　　 焦慮障礙是精神科常見疾病之一,焦慮一恐懼情緒是其主要特征。研究表明成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)海馬區(qū)的神經(jīng)再生在焦慮障礙的發(fā)生、發(fā)展及治療中起著重要作用。條件性恐懼的獲得、表達(dá)、消除過程均與海馬有關(guān)。本研究主要觀察條件性恐懼消除對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元再生的影響,從而探討焦慮障礙的發(fā)生機(jī)制及治療焦慮障礙的新途徑。
　　 材料與方法
　　 一、實(shí)驗(yàn)材料
　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
　　 采用雄性SD成年大鼠32只,

2、體重220-270g,由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
　　 2、實(shí)驗(yàn)試劑
　　 5-BrdU(sigma),大鼠抗5-BrdU單克隆抗體(abcam,ab6326),SABC試劑盒、DAB顯色劑均購自武漢博士德公司。
　　 3、實(shí)驗(yàn)儀器
　　 ZH-DSX2大鼠穿梭箱(安徽淮北正華科技公司),光學(xué)顯微鏡(Nikon,Japan)、冰凍切片機(jī)(Leica,Germany)、低溫恒溫箱(Yamato,Chi

3、na)。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 1、條件性恐懼模型制作
　　 在較安靜的環(huán)境下,將受試大鼠置于條件恐懼箱內(nèi)適應(yīng)1min,1min適應(yīng)結(jié)束后,給大鼠十秒鐘(60dB)聲音刺激,并且在聲音刺激的最后兩秒給予(1mA)足底電刺激,最后一起結(jié)束,重復(fù)上述過程五次,時(shí)間間隔隨機(jī)。
　　 2、行為實(shí)驗(yàn)
　　 大鼠進(jìn)行連續(xù)三天、每天一次的足底電擊刺激以后(每天實(shí)驗(yàn)時(shí)間:上午9:00-11:00),將其隨機(jī)分

4、為四組:BrdU2h實(shí)驗(yàn)組(8只)、BrdU2h對(duì)照組(8只)和BrdU28d實(shí)驗(yàn)組(8只)、BrdU28d對(duì)照組(8只)。連續(xù)六天每天將BrdU2h實(shí)驗(yàn)組和BrdU28d實(shí)驗(yàn)組大鼠暴露在電擊箱中三分鐘但是不再給予電刺激,使其形成恐懼性消除學(xué)習(xí),同時(shí)每天觀察并記錄大鼠的僵住行為。消除后28d將BrdU28d實(shí)驗(yàn)組和BrdU28d對(duì)照組再次暴露在電擊箱中,只給予聲音刺激,測(cè)量其僵住行為。
　　 3、神經(jīng)再生的檢測(cè)
　　 在

5、最后一次消除結(jié)束兩小時(shí)后,全部大鼠腹腔注射溴脫氧尿苷(BrdU)(50mg/kg)。每兩小時(shí)注射一次,一共注射四次,最后一次注射后兩小時(shí)BrdU2h實(shí)驗(yàn)組和BrdU2h對(duì)照組進(jìn)行心臟灌流處死,BrdU28d實(shí)驗(yàn)組和BrdU28d對(duì)照組28天后心臟灌流處死。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法,檢測(cè)各組大鼠海馬齒狀回(DG)的神經(jīng)細(xì)胞增殖和再生數(shù)量的表達(dá)變化。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1、在消除過程中大鼠的僵住時(shí)間逐漸下降,消除過程中第一天

6、與第四天、第五天、第六天之間僵住時(shí)間均存在顯著差異(P＜0.01)。
　　 2、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示BrdU2h實(shí)驗(yàn)組增殖神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)量明顯高于BrdU2h對(duì)照組(P＜0.05);BrdU28d實(shí)驗(yàn)組存活的神經(jīng)元數(shù)量明顯高于BrdU28d對(duì)照組(P＜0.01)。
　　 結(jié)論
　　 1、消除過程中大鼠的僵住時(shí)間逐漸下降,表明消除抑制了大鼠焦慮恐懼情緒。
　　 2、條件性恐懼實(shí)驗(yàn)組大鼠與對(duì)照組相比,大鼠海