新生大鼠慢性高氧性肺損傷中HOXB5表達變化及其作用分析.pdf

1、目的： 1、建立新生大鼠高氧性肺損傷的模型； 2、觀察高氧性肺損傷過程中HOXB5蛋白表達的變化，探討其與高氧肺損傷肺形態(tài)變化的關(guān)系，為臨床防治高氧性肺損傷提供理論依據(jù)。 方法： 用新生12小時內(nèi)的SD大鼠60只，隨機分為兩組：Ⅰ對照組（空氣組）Ⅱ?qū)嶒灲M（高氧組），每組各30只。再按生后24小時末、3天、5天、7天、14天、21天6個時間點分為6個亞組，每亞組各5只；Ⅰ組置于室內(nèi)鼠籠清潔環(huán)境飼養(yǎng)；Ⅱ組置于

2、自制氧箱持續(xù)通入醫(yī)用純氧飼養(yǎng)，保證氧氣濃度在85％～90％。各時間點處死動物，取右肺制肺組織均漿，考馬斯亮蘭法測定肺組織均漿中總蛋白含量的變化；western blot法測定肺組織中HOXB5基因蛋白表達定量分析；耿左肺行免疫組織化學(xué)結(jié)合顯微圖像分析檢測HOXB5基因蛋白的表達。 結(jié)果： 1、高氧組3天新生大鼠精神差，7天后體重增長不明顯，呼吸急促，活動遲緩。 2、肺組織切片HE染色：實驗組3天起見肺毛細血管擴張

3、，肺泡充血有炎性細胞浸潤；高氧5天時肺出血、炎性滲出較前明顯；高氧7天時炎癥反應(yīng)減輕，肺泡腔擴大，肺泡壁薄厚不均，肺泡分化異常；高氧14天時肺泡腔炎性滲出不明顯，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，血管結(jié)構(gòu)紊亂；高氧21天時間質(zhì)出現(xiàn)纖維化，彈力蛋白增多，有效換氣肺泡數(shù)目減少、體積增大、肺泡間隔減少，肺小血管數(shù)目減少，形成結(jié)構(gòu)簡單的肺泡。 3、肺組織勻漿TP變化：生后24小時末兩組無差異（p>0．05）；第3天時實驗組含量高于對照組（p<0．05）；第

4、5天時兩組間無差異，且實驗組內(nèi)3天與5天相比無差異（p>0．05）；第7天時實驗組明顯升高（p<0．01）；且隨高氧暴露時間的延長TP含量繼續(xù)升高，至實驗終點21天時與對照組相比差異非常有顯著性（p<0．01）。 4、肺組織HOXB5基因蛋白表達（免疫組織化學(xué)）：正?？諝鈱φ战M肺組織中HOXB5蛋白表達在不同時間點呈現(xiàn)出起伏不定的變化特點，新生大鼠生后24小時內(nèi)水平最高；除生后第5天時有較高水平外其余4個時間點（3天、7天、14

5、天、21天）均處于低水平，且3天、14天、21天3個時間點表達水平無差異（p>0．05）。高氧暴露后，HOXB5基因蛋白表達與對照組相比呈現(xiàn)相同的變化趨勢但變化時間滯后。除生后24小時末和生后21天2個時間點表達無差異（p>0．05）外，從生后第3天起，第5天、7天、14天相應(yīng)的4個時間點與對照組相比差異非常有顯著性（p<0．01），分別表現(xiàn)為增多、減少、增多、增多；同時實驗組第5天、第7天分別與對照組第3天、第5天相比差異無顯著性（p

6、>0．05）。從而形成兩組相同的蛋白水平變化趨勢。 5、肺組織HOXB5基因蛋白表達定量分析（Western Blot）：正常空氣對照組HOXB5基因蛋白表達量出現(xiàn)生后24小時最高；3天降低；5天較高；7天較低；14天、21天更低的波浪狀變化趨勢。且3天、14天、21天、3個時間點間的表達量差異無顯著性（p>0．05）。高氧暴露后除生后24小時末和生后21天2個時間點表達與對照組無差異（p>0．05）外，生后第3天、5天、7天、

7、14天表達與照組相比差異均有顯著性（p<0．05），分別表現(xiàn)為增多、減少、增多、增多；但實驗組第5天、第7天分別與對照組第3天、第5天相比差異無顯著性（p>0．05）。高氧暴露后Western Blot檢測法所得HOXB5基因蛋白表達變化與免疫組化得出的結(jié)果相一致，也表現(xiàn)為與對照組變化趨勢相似但變化時間滯后的特點。 結(jié)論： 1、長期的高濃度氧可導(dǎo)致新生大鼠的慢性肺損傷，病理表現(xiàn)為肺組織充血出血、炎性滲出、肺泡數(shù)目減少結(jié)構(gòu)

8、簡單、肺血管紊亂； 2、高氧肺損傷新生大鼠肺均漿中TP含量持續(xù)增加，3天時的增加提示高氧作用早期導(dǎo)致了肺的急性炎癥反應(yīng)；5天時炎癥反應(yīng)趨于穩(wěn)定；7天后繼續(xù)增加提示高氧致慢性肺損傷后肺組織成分有所改變； 3、正常新生大鼠肺組織中HOXB5基因蛋白表達呈現(xiàn)波浪型的變化特點，提示肺發(fā)育過程中不同時間點HOXB5蛋白有不同的作用，早期（24h內(nèi)）調(diào)節(jié)新生動物支氣管分支形成，后期（5d）與立方狀肺泡上皮，主要是Ⅱ肺泡上皮的發(fā)育和成