觀察穿心蓮有效成分API0134對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞CD40表達(dá)是否起干預(yù)作用.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化是一種免疫調(diào)節(jié)參與的慢性炎癥性疾病，研究表明，CD40/CD40L相互作用可調(diào)節(jié)促炎癥細(xì)胞因子、趨化因子和粘附分子的表達(dá)，啟動(dòng)人體的免疫系統(tǒng)的活動(dòng)，促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生與發(fā)展，參與了粥樣斑塊的破裂及所激發(fā)的血栓形成過(guò)程。阻斷CD40/CD40L互相刺激通路不但可以降低動(dòng)脈粥樣硬化病變程度，而且形成低炎癥和高纖維化穩(wěn)定的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊,減少動(dòng)脈粥樣硬化的臨場(chǎng)并發(fā)癥的發(fā)生。前期研究證實(shí)API0134具有顯著的抗動(dòng)脈粥樣

2、硬化的作用，其作用機(jī)制可能是通過(guò)阻礙CD40/CD40L這一炎癥信號(hào)通道，抑制了免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)穿心蓮有效成分API0134，對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞CD40表達(dá)水平的干預(yù)結(jié)果，判斷API0134抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用是否與抑制CD40/CD40L這一信號(hào)通道有關(guān)。
　　 目的：將培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞放在具有相同終濃度為30μg/ml，濃度的低密度脂蛋白（ox-LDL）,3個(gè)濃度分別為10 μɡ/ml，50μg/

3、ml，100μg/ml的API0134成分，培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)后，檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞CD40的表達(dá)水平，從而觀察穿心蓮的有效成分API0134，對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞CD40/CD40L的相互作用是否起干預(yù)作用。
　　 方法：分離和培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分組：將復(fù)制的泡沫細(xì)胞分為四組；對(duì)照組:不加API0134成分；3個(gè)濃度分別為10 μɡ/ml，50μg/ml，100μg/ml的API0134成分，

4、同時(shí)加入含有10％小牛血清的1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)24小時(shí)。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組的CD40表達(dá)水平。按照以下方法分為三組行免疫組化檢測(cè)：空白對(duì)照，低密度脂蛋白（OX-LDL），OX-LDL+API0134。以免疫熒光的強(qiáng)度代表CD40表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)100μg/ml的穿心蓮有效成分API0134對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞CD40mRNA表達(dá)水平抑制作用。同對(duì)照組比較，具