穿心蓮有效部位抑制MCF-7-ADM細胞的機制研究.pdf

1、在我國，乳腺癌居女性惡性腫瘤的首位?；瘜W藥物治療是腫瘤治療的主要手段之一，但腫瘤多藥耐藥現(xiàn)象的出現(xiàn)常常導致化療失敗。腫瘤細胞可通過多種機制產(chǎn)生多藥耐藥性，其中腫瘤代謝重編程賦予了腫瘤細胞生存的優(yōu)勢。然而，在腫瘤研究中，與臨床治療密切相關的腫瘤多藥耐藥研究卻未在腫瘤能量代謝方面得到特別的關注。除了化學藥物，在我國傳統(tǒng)中藥因其低毒有效而被用于腫瘤的治療。中藥穿心蓮是爵床科植物穿心蓮(Andrographis paniculata(Burm.

2、f.) Nees)的干燥地上部分，以穿心蓮內(nèi)酯為代表的二萜內(nèi)酯類化合物是其主要藥效物質(zhì)基礎，具有廣譜的抗腫瘤作用。本課題采用現(xiàn)代技術(shù)富集得到穿心蓮有效部位(AEP)，擬以阿霉素(ADM)耐受乳腺癌MCF-7/ADM為模型探究穿心蓮有效部位(AEP)抗腫瘤多藥耐藥的作用，并試圖從調(diào)控腫瘤能量代謝的角度探討其抑制MCF-7/ADM細胞的作用機制。
　　本研究以人乳腺癌MCF-7和ADM耐受人乳腺癌MCF-7/ADM細胞為模型，采用MT

3、T法考察AEP和AEP中含有的四種主要的二萜內(nèi)酯類成分(A、DDA、DA和NA)及其混合物AMP對這兩種細胞增殖的影響；在光學顯微鏡下觀察腫瘤細胞的形態(tài)學變化；利用DAPI單染法、AO/EB雙染法和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測腫瘤細胞核的形態(tài)學變化和腫瘤細胞死亡情況；利用Western Blot方法以PKM2和FASN為靶點分別探究AEP對MCF-7和MCF-7/ADM細胞有氧糖酵解和脂肪酸從頭合成途徑的影響，并考察AE

4、P對procaspase-3表達水平和Bcl-2/Bax比值的影響。MTT結(jié)果表明，A對兩種細胞的IC50分別是7.63±1.24、4.96±1.00μg/mL(48 h)和3.81±0.79、2.52±0.18μg/mL(72 h)，其對兩種腫瘤細胞均具有強烈的增殖抑制作用。AEP作用48 h、72 h后，對兩種腫瘤細胞的IC50分別是28.24±1.68、14.55±2.15μg/mL和17.08±1.68、8.10±1.23μg/

5、mL。作用相同時間，AEP對MCF-7細胞的增殖抑制作用與DDA、DA、NA和AMP沒有顯著性差異(P>0.05)，但AEP對MCF-7/ADM細胞增殖的抑制作用明顯優(yōu)于MCF-7細胞(P<0.01)。而DDA和DA對MCF-7/ADM細胞的抑制作用顯著弱于MCF-7細胞。腫瘤細胞形態(tài)學實驗結(jié)果表明：AEP作用48 h后，隨著濃度增大，MCF-7和MCF-7/ADM貼壁細胞數(shù)目逐漸減少，并出現(xiàn)細胞皺縮變圓，核染色質(zhì)濃縮，凋亡小體形成等典

6、型的細胞凋亡特征。同時，當AEP的濃度為15～40μg/mL時，MCF-7/ADM細胞也出現(xiàn)橙色染色質(zhì)碎片彌漫分布的細胞壞死的特征。Annexin V-FITC/PI雙染實驗結(jié)果也表明AEP能夠誘導MCF-7和MCF-7/ADM細胞凋亡，且當濃度為40μg/mL時， AEP能夠顯著引起MCF-7/ADM細胞發(fā)生壞死，細胞壞死率為42.80％。當AEP濃度為5、10、15μg/mL時，MCF-7細胞中的PKM2、FASN、procaspa

7、se-3與空白對照組相比未見明顯變化；當AEP濃度增大至20、40μg/mL時，上述三種蛋白的表達水平明顯降低。相較MCF-7細胞而言，MCF-7/ADM細胞中的上述三種蛋白的表達更易受AEP影響。當AEP僅為5μg/mL時，MCF-7/ADM細胞中PKM2、FASN、procaspase-3的表達水平即明顯降低。當AEP濃度繼續(xù)增大時，加藥組中的上述三種蛋白表達量更低。然而，AEP對兩種細胞中Bcl-2/Bax比值影響較小。僅當AEP