PKG對巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)及炎癥因子分泌的影響.pdf

1、目的:探討PKG對巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)密切相關(guān)分子ABCA1蛋白表達(dá)的影響,以及PKG對巨噬細(xì)胞源性泡沫中炎癥因子IL-6、IL-10和TNF-α分泌的影響。
　　方法:THP-1單核細(xì)胞用160nmol/L的佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞,再以50mg/Lox-LDL預(yù)處理細(xì)胞48小時使其造模形成泡沫細(xì)胞。實驗分為巨噬細(xì)胞組,泡沫細(xì)胞組,PKG激動劑處

2、理組和PKG抑制劑處理組等。顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)膽固醇聚集,Western Blot方法檢測分析培養(yǎng)細(xì)胞ABCA1蛋白的表達(dá),ELISA方法檢測培養(yǎng)細(xì)胞上清液中IL-6,IL-10,TNF-α的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:THP-1細(xì)胞在顯微鏡下呈圓形或橢圓形,單個懸浮生長,細(xì)胞透亮。巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成功后,細(xì)胞貼壁生長,變成不規(guī)則形或梭形,細(xì)胞伸出偽足。以50mg/Lox-LDL處理巨噬細(xì)胞48h后,油紅O染色,

3、顯微鏡下觀察,可見紅染的脂質(zhì)占細(xì)胞比例增大、著色較深,絕大部分細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量>50％,即造模成功為泡沫細(xì)胞。
　　PKG激動劑8-Br-cGMP處理巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞后,ABCA1蛋白表達(dá)量顯著增加(P<0.05);PKG抑制劑KT-5823處理巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞后,ABCA1蛋白表達(dá)量顯著減少(P<0.05)。
　　PKG激動劑8-Br-cGMP處理巨噬細(xì)胞后,IL-6分泌顯著減少(P<0.05),IL-10分泌顯著增

4、加(P<0.05)。PKG抑制劑KT-5823處理巨噬細(xì)胞后,IL-10分泌顯著減少(P<0.05)。泡沫細(xì)胞中的IL-6、TNF-α與巨噬細(xì)胞相比顯著增加(P<0.05),IL-10的表達(dá)沒有差異((P>0.05);PKG激動劑8-Br-cGMP處理泡沫細(xì)胞后,IL-6和TNF-α分泌顯著減少(P<0.05),IL-10分泌顯著增加(P<0.05);PKG抑制劑KT-5823處理泡沫細(xì)胞后,IL-6和TNF-α分泌減少(P<0.05)

5、,IL-10分泌也減少(P>0.05)。激動劑或抑制劑處理巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞后IL-10分泌增減變化正好相反,激動劑處理后IL-10分泌增加,抑制劑處理后IL-10分泌減少,提示IL-10在巨噬細(xì)胞中作為抗炎因子發(fā)揮作用也許與PKG信號通路有關(guān)。PKG激動劑及抑制劑處理巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞后,IL-6和TNF-α分泌均減少,其表達(dá)調(diào)控似乎與PKG信號通路無關(guān)。以上結(jié)果有待進(jìn)一步深入研究。
　　結(jié)論:依據(jù)前期研究基礎(chǔ)與本次實驗結(jié)果,