同型半胱氨酸對(duì)巨噬細(xì)胞CD147表達(dá)的影響及他汀的干預(yù)作用.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是冠心病的主要病理學(xué)基礎(chǔ)，其發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)同“內(nèi)皮損傷學(xué)說(shuō)”，即多種危險(xiǎn)因素?fù)p傷內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)膜通透性增高，脂質(zhì)進(jìn)入內(nèi)膜，單核巨噬細(xì)胞滲入內(nèi)膜并吞噬脂質(zhì)，形成泡沫細(xì)胞;泡沫細(xì)胞不斷凋亡，形成脂質(zhì)核心，斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)，降解細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致纖維帽變薄，逐漸演變?yōu)椴环€(wěn)定性斑塊。因此巨噬細(xì)胞在AS過(guò)程

2、起了至關(guān)重要的作用。
　　CD147是一種表達(dá)于人體多種組織細(xì)胞膜上的跨膜糖蛋白，可誘導(dǎo)MMP表達(dá)，而MMP可降解構(gòu)成粥樣斑塊纖維帽的主要成分，從而加速斑塊不穩(wěn)定。
　　同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)是90年代被確定為新型的AS獨(dú)立危險(xiǎn)因素，研究證實(shí)Hcy誘導(dǎo)多種細(xì)胞表達(dá)MMP增多，但對(duì)其具體機(jī)制尚未完全闡明，Hcy是否通過(guò)促進(jìn)MMP的上游分子CD147表達(dá)而引起MMP分泌，參與AS發(fā)生發(fā)展過(guò)程，目前鮮有報(bào)

3、道。
　　他汀類(lèi)藥物不僅具有強(qiáng)大降脂作用，且能穩(wěn)定及逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣斑塊進(jìn)展。有研究證實(shí)他汀能抑制斑塊內(nèi)CD147及MMP表達(dá)，而Hcy是動(dòng)脈斑塊進(jìn)展的危險(xiǎn)因素，他汀能否抑制Hcy誘導(dǎo)的CD147表達(dá)，目前未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　1、探討Hcy對(duì)U-937來(lái)源巨噬細(xì)胞CD147表達(dá)的影響。
　　2、瑞舒伐他汀干預(yù)Hcy處理的巨噬細(xì)胞，確定其對(duì)Hcy誘導(dǎo)CD147表達(dá)的影響。
　　3、MTT檢測(cè)Hcy、瑞舒伐

4、他汀對(duì)U-937來(lái)源巨噬細(xì)胞活性的影響。
　　方法：
　　1、構(gòu)建巨噬細(xì)胞模型
　　將U937細(xì)胞以5×105/L密度接種于細(xì)胞板中，加10nmol/L佛波酯(PMA)刺激48h，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定分化為巨噬細(xì)胞。
　　2、Hcy、瑞舒伐他汀干預(yù)
　　分化為巨噬細(xì)胞后，換無(wú)血清培養(yǎng)24h，按如下處理:(1)分別加入濃度為0、50、100、500umol/L的Hcy孵育48h。(2)500umol/L

5、Hcy孵育0、12、24、48h。(3)0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L的瑞舒伐他汀和500umol/LHcy共培養(yǎng)48h。PCR、Westernblot、免疫熒光檢測(cè)巨噬細(xì)胞CD147的表達(dá)。
　　3、MTT檢測(cè)細(xì)胞活性
　　將U937細(xì)胞以2×104個(gè)細(xì)胞/孔接種于96孔板中，Hcy、瑞舒伐他汀處理后，加10ulMTT溶液(5g/L)，37℃孵育4h，棄上清，加100ulDMSO，震蕩10min，酶標(biāo)

6、儀上測(cè)490nm處吸光度。
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用x±s表示，應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，多組樣本均數(shù)比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、未處理的U937細(xì)胞為形態(tài)均一類(lèi)圓形，呈懸浮生長(zhǎng)。PMA處理48h，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，為梭形、星狀或不規(guī)則形。
　　2、PCR:CD147mRNA表達(dá)量隨Hcy濃度升高（或Hcy孵育時(shí)間延長(zhǎng)）而逐

7、漸增加，其中100、500umol/LHcy組（或24h、48hHcy組）較對(duì)照組明顯增加(P＜0.05)。瑞舒伐他汀與500umol/LHcy共處理細(xì)胞48h后，CD147mRNA隨瑞舒伐他汀濃度增加而逐漸減少，其中10-7-10-5mol/L瑞舒伐他汀組CD147mRNA較對(duì)照組明顯減少(P＜0.05)。
　　3、western blot:CD147蛋白表達(dá)量隨著Hcy的濃度升高（或Hcy孵育時(shí)間延長(zhǎng)）而逐漸增加，其中，100

8、、500umol/LHcy組（或24h、48hHcy組）與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同濃度瑞舒伐他汀與500umol/LHcy共處理U-937細(xì)胞48h后，CD147蛋白表達(dá)量隨瑞舒伐他汀濃度增加而逐漸減少，其中10-7-10-5mol/L瑞舒伐他汀組較對(duì)照組明顯減少(P＜0.05）。
　　4、免疫熒光:0umol/LHcy處理的細(xì)胞膜上熒光淺淡，500umol/LHcy處理的熒光明顯增強(qiáng)。而10-5mol/L瑞