低劑量環(huán)磷酰胺富集肝癌干細胞的實驗研究.pdf

1、中山大學博士學位論文低劑量環(huán)磷酰胺富集肝癌干細胞的實驗研究姓名：譚屾申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：陳積圣宋爾衛(wèi)20090423中山人學博：學位論文低劑暈環(huán)磷酰胺富集盯癌T細胞的實驗研究研究目標1建立富集肝癌干細胞的方法，解決肝癌干細胞研究中因癌干細胞數(shù)量少所致的瓶頸問題。2比較利用低劑量環(huán)磷酰胺富集肝癌干細胞在不同劑量、不同化療時長情況下的富集效率。研究方法圍繞上述目標，本研究采用以下研究方法：l獲得經過低劑量環(huán)磷酰胺富集的肝

2、癌細胞：將SMMC一7721細胞株種植于裸鼠頸背部皮下，形成的異種異植瘤在體內連續(xù)傳三代，同時給予不同低劑量化療藥環(huán)磷酰胺(Omg／Kg，2mg／Kg，5mg／Kg，lOmg／Kg)富集肝癌細胞。2比較低劑量環(huán)磷酰胺富集的肝癌干細胞效率的體外實驗：通過球囊形成率比較在不同化療壓力下富集的三代肝癌干細胞的體外自我更新能力；使用MTT法比較不同化療壓力下富集的三代肝癌干細胞的分化增殖能力；通過軟瓊脂克隆形成率和平板克隆形成率比較這三代在化療

3、壓力下富集的肝癌干細胞的克隆增殖能力；通過ELISA法比較肝癌干細胞的分化能力；通過流式細胞分析的方法檢測朊蛋白的表達，以評價朊蛋白是否可做為肝癌干細胞的標志物；應用流式細胞分析的方法檢測SP細胞含量，比較在不同化療壓力及不同化療時長下富集肝癌干細胞的效率。3比較低劑量環(huán)磷酰胺富集的肝癌干細胞效率的體內實驗：通過將不同數(shù)量級的經不同劑量環(huán)磷酰胺富集的三代肝癌干細胞接種到裸鼠頸背部皮下，觀察比較它們的體內成瘤能力，以比較不同化療壓力及不同