低劑量環(huán)磷酰胺富集肝癌干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文低劑量環(huán)磷酰胺富集肝癌干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究姓名：譚屾申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：陳積圣宋爾衛(wèi)20090423中山人學(xué)博：學(xué)位論文低劑暈環(huán)磷酰胺富集盯癌T細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究研究目標(biāo)1建立富集肝癌干細(xì)胞的方法，解決肝癌干細(xì)胞研究中因癌干細(xì)胞數(shù)量少所致的瓶頸問(wèn)題。2比較利用低劑量環(huán)磷酰胺富集肝癌干細(xì)胞在不同劑量、不同化療時(shí)長(zhǎng)情況下的富集效率。研究方法圍繞上述目標(biāo)，本研究采用以下研究方法：l獲得經(jīng)過(guò)低劑量環(huán)磷酰胺富集的肝

2、癌細(xì)胞：將SMMC一7721細(xì)胞株種植于裸鼠頸背部皮下，形成的異種異植瘤在體內(nèi)連續(xù)傳三代，同時(shí)給予不同低劑量化療藥環(huán)磷酰胺(Omg／Kg，2mg／Kg，5mg／Kg，lOmg／Kg)富集肝癌細(xì)胞。2比較低劑量環(huán)磷酰胺富集的肝癌干細(xì)胞效率的體外實(shí)驗(yàn)：通過(guò)球囊形成率比較在不同化療壓力下富集的三代肝癌干細(xì)胞的體外自我更新能力；使用MTT法比較不同化療壓力下富集的三代肝癌干細(xì)胞的分化增殖能力；通過(guò)軟瓊脂克隆形成率和平板克隆形成率比較這三代在化療

3、壓力下富集的肝癌干細(xì)胞的克隆增殖能力；通過(guò)ELISA法比較肝癌干細(xì)胞的分化能力；通過(guò)流式細(xì)胞分析的方法檢測(cè)朊蛋白的表達(dá)，以評(píng)價(jià)朊蛋白是否可做為肝癌干細(xì)胞的標(biāo)志物；應(yīng)用流式細(xì)胞分析的方法檢測(cè)SP細(xì)胞含量，比較在不同化療壓力及不同化療時(shí)長(zhǎng)下富集肝癌干細(xì)胞的效率。3比較低劑量環(huán)磷酰胺富集的肝癌干細(xì)胞效率的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：通過(guò)將不同數(shù)量級(jí)的經(jīng)不同劑量環(huán)磷酰胺富集的三代肝癌干細(xì)胞接種到裸鼠頸背部皮下，觀察比較它們的體內(nèi)成瘤能力，以比較不同化療壓力及不同