血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、基質(zhì)蛋白酶基因多態(tài)性與上皮性卵巢癌的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），又稱血管通透因子，它可以特異性地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，增加血管通透性，促進(jìn)血管的形成；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一個(gè)高度鋅離子依賴的蛋白水解酶家族，它能引起基底膜消化、細(xì)胞游走、新基底膜的形成，促進(jìn)新血管的形成。二者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的過程中起著十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)VEGF及MMPs基因中存在一些多態(tài)性位點(diǎn)可以通過調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄或蛋白的表達(dá)水平而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究旨在探討V

2、EGF-2578C/A和VEGF+936C/T及MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G單核甘酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNPs）與我國(guó)北方婦女上皮性卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，從分子生物學(xué)水平為卵巢癌的預(yù)防及診治提供依據(jù)。
　　 方法：采用基于醫(yī)院的病例.對(duì)照研究方法，以256例卵巢癌患者和329例健康對(duì)照婦女為研究對(duì)象。采用蛋白酶K-氯化鈉鹽析法提取基因組DNA，聚合酶鏈反應(yīng)

3、.限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）分析方法，對(duì)VEGF-2578C/A、VEGF+936C/T、MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G4個(gè)SNPs進(jìn)行基因分型。
　　 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5版軟件包（SPSS Company，Chicago，Illinois，USA）

4、進(jìn)行處理。正常對(duì)照組各基因型頻率分布行x2檢驗(yàn)做Hardy-Weinberg平衡分析。病例組與對(duì)照組的年齡差異采用t檢驗(yàn)，基因型和等位基因頻率分布比較采用x2檢驗(yàn)，以非條件logistic回歸方法計(jì)算表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比（odds ratio，OR）及其95％可信區(qū)間（confidence interval，CI）。采用EH軟件分析VEGF-2578C/A和VEGF+936C/T以及MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G基

5、因單體型頻率，2LD軟件分析連鎖不平衡狀態(tài)。P<0.05作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.VEGF-2578C/A和VEGF+936C/T多態(tài)與上皮性卵巢的關(guān)系
　　 1.1 VEGF-2578C/A多態(tài)的基因型和等位基因頻率分布在上皮性卵巢癌組和對(duì)照組中無顯著性差異（P=0.42和P=0.64）。與A/A+C/A基因型比較，C/C基因型與上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，OR值為0.87（95％CI=

6、0.63～1.21）。以病理類型、臨床分期或確診時(shí)年齡分層分析，VEGF-2578C/A的基因型和等位基因頻率在各組間分布也均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P值均大于0.05）。
　　 1.2 VEGF+936C/T多態(tài)的基因型和等位基因頻率分布在上皮性卵巢癌組和對(duì)照組中亦無顯著性差異（P=0.67和P=0.79）。與T/T+C/T基因型比較，C/C基因型與上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，OR值為0.93（95％CI=0.65～1.32）。以病

7、理類型、臨床分期或確診時(shí)年齡分層分析，VEGF+936C/T的基因型和等位基因頻率在各組間分布也均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P值均大于0.05）。
　　 1.3采用EH和2LD軟件分析發(fā)現(xiàn)VEGF-2578C/A和+936C/T SNPs間不存在連鎖不平衡關(guān)系（D'=0.15）。
　　 2.MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G多態(tài)與上皮性卵巢癌的關(guān)系
　　 2.1 MMP-12-82 A/G SNP的A/A

8、、A/G、G/G三種基因型頻率在卵巢癌組和對(duì)照組中分別為93.0％、7.0％、0和96.7％、3.3％、0，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.04）；卵巢癌組G等位基因頻率顯著高于對(duì)照組，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.04）。與A/A基因型相比，A/G基因型可顯著增加上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=2.19，95％CI=1.01～4.72）。根據(jù)確診年齡分層分析發(fā)現(xiàn)，與A/A基因型相比，A/G基因型可顯著增加<50歲上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（O

9、R=3.00，95％CI=1.19～7.36）；根據(jù)病理類型和臨床分期分層分析發(fā)現(xiàn)，與A/A基因型相比，A/G基因型有增加低分化或晚期卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(shì)（OR=3.12，95％CI=0.97～10.61：OR=2.21，95％CI=0.95～5.12）。
　　 2.2 MMP-13-77 A/G SNP的A/A、A/G、G/G三種基因型頻率在卵巢癌組和對(duì)照組中分別為25.0％、51.6％、23.4％和20.7％、50.2％、2

10、9.2％，兩組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.21）；A、G等位基因頻率在卵巢癌組和對(duì)照組相比亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.09）。與G/G基因型相比，A/A基因型有增加上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(shì)（OR=1.51，95％CI=0.94～2.41）；而A/G基因型并不能改變上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)病理類型分層分析發(fā)現(xiàn)，與G/G基因型相比，A/A基因型可顯著增加粘液性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=9.88，95％CI=2.18～44.91），并有增加漿

11、液性卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(shì)（OR=1.86，95％CI=0.95～3.64）；根據(jù)臨床分期分層分析發(fā)現(xiàn)，與G/G基因型相比，A/G和A/A基因型均可顯著增加早期上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=1.95，95％CI=1.02～3.73；OR=2.62，95％CI=1.28～5.39）。
　　 2.3采用2LD軟件分析發(fā)現(xiàn)MMP-12-82 A/G和MMP-13-77A/G SNPs間存在連鎖不平衡關(guān)系（D'=0.51）。應(yīng)用EH軟件對(duì)

12、MMP-12-82 A/G及MMP-13-77 A/G SNPs進(jìn)行單體型分析，結(jié)果顯示：MMP-12A/MMP-13G（53.3％）、MMP-12A/MMP-13A（45.0％）、MMP-12G/MMP-13G（0.9％）和MMP-12G/MMP-13A（0.8％）四種單體型分布在上皮性卵巢癌組與對(duì)照組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.VEGF-2578C/A和V：EGF+936C/T的基因多態(tài)

13、性可能與中國(guó)北方婦女上皮性卵巢癌遺傳易感性無關(guān)。
　　 2.與A/A基因型相比，攜帶MMP-12-82A/G基因型可以顯著增加中國(guó)北方婦女上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并與卵巢癌的病理類型及年齡有顯著關(guān)聯(lián)性，其可能是上皮性卵巢癌發(fā)病的潛在危險(xiǎn)因素。
　　 3.與G/G基因型相比，攜帶MMP-13-77A/A基因型有增加中國(guó)北方婦女上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(shì)，并與卵巢癌的病理類型及臨床分期有顯著關(guān)聯(lián)，其可能增加上皮性卵巢癌的發(fā)