Elafin在胞質(zhì)內(nèi)的抗炎機制及對氣道黏液高分泌的影響.pdf

1、目的:探討Elafin在氣道上皮細胞系16HBE胞質(zhì)內(nèi)的抗炎機制及其對黏液高分泌的影響和相關的機制。
　　 方法:(1)體外培養(yǎng)人支氣管上皮細胞系16HBE細胞,將已構建好的pEGFP-N1-Elafin載體轉(zhuǎn)染到細胞中,并以空質(zhì)粒載體作其對照,以外源性腫瘤壞死因子(TNF)-α作為刺激物共同孵育。將細胞分為3組:①空白對照組;②空質(zhì)粒載體+外源性TNF-α(10μg/L)組;⑧重組質(zhì)粒+外源性TNF-α(10μg/L)組。間接

2、免疫熒光細胞化學法結合激光共聚焦顯微鏡檢測細胞核中核因子(NF)-κB的活性,ELISA檢測細胞上清液中炎性介質(zhì)(選取IL-1β、IL-8作為代表)的含量,Western blot檢測SUMO-1-p-IκBα含量。(2)給予外源性EGF作為刺激物共同孵育。將細胞分為3組:①空白對照組;②空質(zhì)粒載體+EGF(25μg/L)組;③重組質(zhì)粒+EGF(25μg/L)組。RT-PCR和ELISA分別檢測細胞內(nèi)黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平

3、和MUC5AC含量。間接免疫熒光細胞化學法結合激光共聚焦顯微鏡檢測細胞核中核因子(NF)-κB的活性。Western blot檢測SUMO-1-p-IκBα含量。
　　 結果:(1)重組質(zhì)粒組的細胞中NF-κB的活性和IL-1β、IL-8的生成量與空質(zhì)粒載體組細胞相比明顯降低而SUMO-1-p-IκBα的含量則顯著高于后者(P＜0.01)。(2)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細胞中MUC5AC mRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.0