Elafin在胞質(zhì)內(nèi)的抗炎機(jī)制及對(duì)氣道黏液高分泌的影響.pdf

1、目的:探討Elafin在氣道上皮細(xì)胞系16HBE胞質(zhì)內(nèi)的抗炎機(jī)制及其對(duì)黏液高分泌的影響和相關(guān)的機(jī)制。
　　 方法:(1)體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞系16HBE細(xì)胞,將已構(gòu)建好的pEGFP-N1-Elafin載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,并以空質(zhì)粒載體作其對(duì)照,以外源性腫瘤壞死因子(TNF)-α作為刺激物共同孵育。將細(xì)胞分為3組:①空白對(duì)照組;②空質(zhì)粒載體+外源性TNF-α(10μg/L)組;⑧重組質(zhì)粒+外源性TNF-α(10μg/L)組。間接

2、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞核中核因子(NF)-κB的活性,ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中炎性介質(zhì)(選取IL-1β、IL-8作為代表)的含量,Western blot檢測(cè)SUMO-1-p-IκBα含量。(2)給予外源性EGF作為刺激物共同孵育。將細(xì)胞分為3組:①空白對(duì)照組;②空質(zhì)粒載體+EGF(25μg/L)組;③重組質(zhì)粒+EGF(25μg/L)組。RT-PCR和ELISA分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平

3、和MUC5AC含量。間接免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞核中核因子(NF)-κB的活性。Western blot檢測(cè)SUMO-1-p-IκBα含量。
　　 結(jié)果:(1)重組質(zhì)粒組的細(xì)胞中NF-κB的活性和IL-1β、IL-8的生成量與空質(zhì)粒載體組細(xì)胞相比明顯降低而SUMO-1-p-IκBα的含量則顯著高于后者(P＜0.01)。(2)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細(xì)胞中MUC5AC mRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.0