抑制老年大鼠中樞交感神經(jīng)緊張性增加對(duì)心肌細(xì)胞收縮功能的影響及其機(jī)制初步探討.pdf

1、目的:交感神經(jīng)緊張性隨著年齡的增加而增加，這會(huì)引起心血管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變。這些改變可能是促發(fā)老年人心血管疾病的危險(xiǎn)因素。長(zhǎng)期中樞交感神經(jīng)緊張性增加可引起β-腎上腺素受體數(shù)目或敏感性的改變，最終導(dǎo)致心肌收縮功能下降。那么，如果抑制中樞交感神經(jīng)的緊張性增加是否可改善老年大鼠的心臟收縮功能。本試驗(yàn)觀察抑制中樞交感神經(jīng)緊張性增加，對(duì)老年大鼠心臟收縮功能、β-腎上腺素受體數(shù)目和敏感性的影響；并進(jìn)一步探討了體外轉(zhuǎn)染肌漿網(wǎng)鈣ATP酶基因?qū)ζ湫?/p>

2、肌細(xì)胞收縮功能的影響。 方法:老年SD大鼠，雌雄不拘，隨機(jī)分為老年可樂定組(可樂定，15ug/kg/d腹腔注射，連續(xù)2周)和生理鹽水對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱老年組生理鹽水1ml/kg/d腹腔注射，連續(xù)2周)。另選成年SD大鼠，雌雄不拘，為成年組(生理鹽水腹腔注射1ml/kg/d，連續(xù)2周)。分別測(cè)定大鼠在體和離體心臟收縮功能。然后，酶法分離各組大鼠心肌細(xì)胞，測(cè)定不同濃度鈣離子和異丙。腎上腺素(ISO)刺激下細(xì)胞收縮功能變化和細(xì)胞存活率；

3、分別阻斷細(xì)胞上β1、β2-AR在同一濃度異丙腎上腺素刺激下觀察細(xì)胞收縮功能。收集各組心肌細(xì)胞，采用Western blot法測(cè)定β-ARs蛋白表達(dá)。最后，利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將SERCA2a基因轉(zhuǎn)染入各組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)，觀察細(xì)胞收縮功能變化。 結(jié)果: 1.成年組、老年組、老年可樂定組大鼠在體和離體心臟收縮功能有如下變化：老年對(duì)照組與成年組以及老年可樂定組之間心率、收縮壓、舒張壓和平均動(dòng)脈壓無明顯變化；與成年組比較，老年對(duì)照組

4、左心室內(nèi)壓變化速率(±dp/dt)下降，左心室舒張末壓(LVEDP)升高；老年可樂定組±dp/dt較老年對(duì)照組改善，LVEDP降低。各組間心肌細(xì)胞存活率無顯著性差異。 2.成年組、老年組、老年可樂定組大鼠心肌細(xì)胞的收縮幅度比較 (1)心肌細(xì)胞對(duì)不同濃度的鈣的刺激反應(yīng)性：在一定范圍內(nèi)(0.6～2.4mmol/L)隨著鈣離子濃度的升高，各組細(xì)胞的收縮幅度增加；成年組心肌細(xì)胞收縮幅度明顯大于老年組，略高于老年可樂定組；老年可樂

5、定組心肌細(xì)胞收縮幅度較老年對(duì)照組增加。 (2)心肌細(xì)胞對(duì)不同濃度異丙腎上腺素刺激收縮反應(yīng)性：老年可樂定組大鼠心肌細(xì)胞隨著異丙腎上腺素濃度的升高(1×10-9～1×10-7mol/L)收縮幅度增加，且收縮幅度小于成年組但大于老年組。 3.分別用選擇性β1-AR阻斷劑CGP20712A和選擇性β2-AR阻斷劑ICI118,551阻斷細(xì)胞上相應(yīng)受體發(fā)現(xiàn)：各組大鼠心肌細(xì)胞在同一濃度異丙腎上腺素刺激作用下引起的收縮反應(yīng)均較正常對(duì)照

6、組明顯降低；單純阻斷β1-AR后老年可樂定組心肌細(xì)胞降低幅度最??；而單純阻斷β2-AR后老年可樂定組心肌細(xì)胞降低幅度較其它組更為明顯。各組心肌細(xì)胞蛋白含量測(cè)定表明：抑制交感緊張性增加對(duì)β1、β2-AR表達(dá)無明顯改變，選擇性的阻斷細(xì)胞上β1、β2-AR，各組心肌細(xì)胞間蛋白表達(dá)量仍無明顯的變化。 4.轉(zhuǎn)染SERCA2a基因的老年組心肌細(xì)胞收縮幅度較未轉(zhuǎn)染的老年組心肌細(xì)胞并沒有明顯改善，而老年可樂定組和成年組心肌細(xì)胞在轉(zhuǎn)入SERCA2

7、a基因后大鼠心肌細(xì)胞收縮幅度較未轉(zhuǎn)染前則明顯增加。 結(jié)論: 1.抑制中樞交感神經(jīng)緊張性增加，可明顯改善老年大鼠在體、離體心臟以及單個(gè)心肌細(xì)胞的收縮功能。 2.抑制中樞交感神經(jīng)緊張性增加，對(duì)成年組、老年組、老年可樂定組大鼠心肌細(xì)胞受體最的表達(dá)并無顯著改變，但心肌細(xì)胞的收縮功能發(fā)生明顯變化，這可能是通過β2-AR的敏感性增加引起的。 3.增加SERCA2a基因的表達(dá)對(duì)老年組心肌細(xì)胞收縮功能無明顯改善，但可改善