益氣活血中藥對(duì)腦出血大鼠腦組織Angiopoietin-1及其受體Tie-2蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的：腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)具有高病死率、高致殘率等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類的生命和健康。其發(fā)病率只占所有類型腦血管病的30％，但其以50％以上的死亡率高居首位，40％的存活者留有嚴(yán)重殘疾，給患者、家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)，是臨床的危急重癥。在祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)里，它屬于“中風(fēng)”范疇，由風(fēng)、火、痰、虛、瘀等因素引起，清代著名醫(yī)家王清任提出氣虛致瘀的觀點(diǎn)，創(chuàng)立益氣活血名方補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療中風(fēng)，自此益氣活血

2、法在腦出血臨床治療中得到廣泛應(yīng)用并且療效肯定。現(xiàn)代基礎(chǔ)研究認(rèn)為，益氣活血中藥具有改善腦出血血腫區(qū)腦血流量及能量代謝、改善腦組織微循環(huán)，能抑制相關(guān)的炎癥反應(yīng)，改善血液流變學(xué)指標(biāo)及促進(jìn)血腫吸收和損傷愈合等作用。腦出血后血腫本身及其缺血、缺氧引起的微循環(huán)繼發(fā)性損害形成了腦出血后重要的病理改變。研究證實(shí)，腦出血血腫區(qū)(血腫內(nèi)部及周邊區(qū))的微循環(huán)系統(tǒng)破壞，局部腦血流量(regional cerebral blood flow，RCBF)的下降，是

3、導(dǎo)致臨床癥狀惡化、影響腦血腫吸收消散的重要原因。因此，通過(guò)促進(jìn)血管新生重新建立血腫區(qū)的微血管，改善血腫區(qū)微循環(huán)進(jìn)而恢復(fù)血腫區(qū)的血液灌注，可為神經(jīng)組織修復(fù)和神經(jīng)功能恢復(fù)奠定基礎(chǔ)。目前已發(fā)現(xiàn)的促進(jìn)血管新生的因子主要包括內(nèi)皮細(xì)胞特異性的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族、促血管生成素(angiopoietin，Ang)家族和多效性血管因子(pleiotropic aulgio

4、genicfactors，PAF)等。其中促血管生成素-1(angiopoietin-1，Ang-1)通過(guò)與其受體-含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪氨酸激酶-2(tyrosine kinase that contains immunoglobulin-like loops andepidermal growth factor-similar-domains-2，Tie-2)結(jié)合，誘導(dǎo)其磷酸化，促進(jìn)血管重塑、穩(wěn)定和成熟并維持成熟血管的

5、完整性及靜息狀態(tài)，并在血管生成過(guò)程中發(fā)揮促進(jìn)出芽及分支的作用。An/Tie-2系統(tǒng)協(xié)同VEGF/VEGFR系統(tǒng)共同調(diào)節(jié)微血管的新生，并最終形成成熟的血管結(jié)構(gòu)，促進(jìn)損傷區(qū)微血管系統(tǒng)重建和血腫區(qū)微循環(huán)條件的改善，恢復(fù)對(duì)血腫區(qū)腦組織的供血供氧，加快血腫的吸收，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)。本實(shí)驗(yàn)擬用益氣活血治法經(jīng)典方劑補(bǔ)陽(yáng)還五湯及其益氣、活血組分分別對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠進(jìn)行干預(yù)，用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(western bloting)觀察益氣

6、活血中藥對(duì)出血后腦組織中Ang-1及其受體Tie-2蛋白表達(dá)的影響，初步探討益氣活血中藥在腦出血后血腫區(qū)微血管系統(tǒng)重建等病理過(guò)程中的作用機(jī)制，為益氣活血中藥在腦出血中的治療提供理論依據(jù)。 方法：155只SD大鼠隨機(jī)分成6組：正常對(duì)照組，假手術(shù)組，模型組，益氣組，活血組，益氣活血組。立體定位向腦內(nèi)右側(cè)蒼白球(前囟后1.40mm，矢狀縫右3.20mm，深5.60mm)注入Ⅶ型膠原酶誘導(dǎo)腦出血大鼠模型。益氣組、活血組和益氣活血組相應(yīng)

7、灌服補(bǔ)陽(yáng)還五湯拆方的益氣方、補(bǔ)陽(yáng)還五湯拆方的活血方和補(bǔ)陽(yáng)還五湯全方。正常對(duì)照組大鼠于1d，其他各組分別于造模術(shù)后并灌胃的1d、4d、7d、14d、21d和28d六個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取5只大鼠。深麻醉后，斷頭法處死大鼠，迅速剝離顱骨，并分離鼠腦取得血腫區(qū)腦組織，運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(western bloting)檢測(cè)正常組及其它各組各時(shí)間點(diǎn)Ang-1和Tie-2受體蛋白的表達(dá)，結(jié)果進(jìn)行光密度掃描半定量分析。 結(jié)果：1.各組各時(shí)間

8、點(diǎn)Ang-1蛋白的表達(dá)：正常組及假手術(shù)組不同時(shí)間點(diǎn)Ang-1表達(dá)未見(jiàn)明顯陽(yáng)性信號(hào)；模型組、益氣組、活血組及益氣活血組腦出血后1d即有Ang-1表達(dá)，模型組至21d達(dá)到高峰，隨后開(kāi)始下降，益氣組、活血組及益氣活血組表達(dá)高峰時(shí)間提前至14d，活血組及益氣活血組至21d仍維持一定的表達(dá)水平；各個(gè)時(shí)間點(diǎn)益氣活血組表達(dá)均高于其他組。 2.各組各時(shí)間點(diǎn)Tie-2受體蛋白的表達(dá)：正常組、假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)Tie-2的表達(dá)未見(jiàn)明顯陽(yáng)性信號(hào)；模型組