雄鼠骨髓干細(xì)胞在雌激素作用下體內(nèi)分化為子宮內(nèi)膜細(xì)胞的研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是雌激素依賴的、婦科常見的良性疾病。目前其病原仍不明確，有多種學(xué)說來解釋EMs的發(fā)生，經(jīng)典的學(xué)說有子宮內(nèi)膜種植學(xué)說、體腔上皮化生學(xué)說、誘導(dǎo)學(xué)說、免疫學(xué)說等，但是僅用現(xiàn)有的一種或某幾種學(xué)說尚不能完美地解釋所有的EMs的發(fā)生。 一些研究結(jié)果提示EMs可能來源于脫落、種植、移位的在位子宮內(nèi)膜干細(xì)胞，但這還是不能完全解釋EMs“良性疾病，惡性行為”的特征。盡管有報道接受女性骨髓移植的婦

2、女的子宮內(nèi)膜細(xì)胞中有相當(dāng)一部分來源于供體，但不能排除女性供者骨髓細(xì)胞中混有少量漂移的子宮內(nèi)膜細(xì)胞成分或者已經(jīng)向子宮內(nèi)膜方向定向分化的前體干細(xì)胞而導(dǎo)致的結(jié)果。因此，骨髓干細(xì)胞能否分化成子宮內(nèi)膜細(xì)胞還有待于進(jìn)一步的研究來證明。 EMs呈現(xiàn)雌激素明顯依賴性，雌激素能促進(jìn)和維持在位子宮內(nèi)膜的生長。而雌激素對EMs的具體作用機制，目前還沒有令人滿意的研究結(jié)果。男性長期服用雌激素發(fā)生EMs，提示雌激素可能是通過促進(jìn)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜方向分化來

3、對EMs起作用的。 總的來說，EMs可能起源于干細(xì)胞，雌激素、逆流經(jīng)血等可能提供了誘導(dǎo)環(huán)境。為了證明這種觀點，首先要證明其他來源的干細(xì)胞能夠分化成子宮內(nèi)膜細(xì)胞。本研究采用雄性轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白(red fluorescent protein，RFP)基因小鼠的骨髓干細(xì)胞為目的干細(xì)胞，以排除骨髓細(xì)胞中混有漂移的子宮內(nèi)膜細(xì)胞或者已經(jīng)向子宮內(nèi)膜方向分化的前體干細(xì)胞，探討異性/雄性來源的骨髓干細(xì)胞在雌激素作用下能否分化為子宮內(nèi)膜細(xì)胞。

4、 方法： 1、取雄性轉(zhuǎn)RFP/RFP基因小鼠的骨髓細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。 2、雌性同系小鼠經(jīng)鈷-60全身照射，照射后將制備的骨髓細(xì)胞懸液尾靜脈注入雌鼠體內(nèi)，然后用含/不含雌激素的水喂養(yǎng)兩個月。 3、兩個月、三個月，分別處死一批小鼠取所需的組織和細(xì)胞。 4、標(biāo)本分別用流式細(xì)胞術(shù)、激光顯微切割術(shù)、免疫組化結(jié)合熒光等方法檢測。 結(jié)果:1、雌鼠骨髓細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明，移植骨髓兩個月后有77.80

5、±4.47％的細(xì)胞表達(dá)RFP，說明骨髓移植是成功的。 2、雌激素水平的檢測結(jié)果表明，單純照射移植骨髓組(Ⅲ組)小鼠雌激素水平與正常組(Ⅴ組)相比是下降的，而補充雌激素組(Ⅳ組)雌激素明顯升高，說明小鼠補充雌激素后體內(nèi)雌激素水平是升高的。 3、各組小鼠子宮的肉眼觀察顯示，照射后移植骨髓各組小鼠的子宮較正常對照小鼠(Ⅳ組)均萎縮，其中，單純照射移植骨髓組(Ⅲ組)的子宮萎縮更明顯，且H.E.染色結(jié)果與肉眼觀察結(jié)果是一致的。

6、 4、抗RFP抗體的免疫組化和紅色熒光檢測顯示，熒光顯微鏡下觀測到的紅色熒光確實來自RFP。激光顯微切割RFP+細(xì)胞的PCR結(jié)果證明小鼠子宮內(nèi)膜RFP+的細(xì)胞是雄性來源的。 5、在移植骨髓2個月后的小鼠子宮內(nèi)膜中發(fā)現(xiàn)，不論是否補充雌激素(Ⅲ組，Ⅳ組)，均可檢測到RFP陽性的間質(zhì)細(xì)胞，但補充雌激素組(Ⅳ組)的小鼠子宮內(nèi)能找到RFP陽性的腺上皮細(xì)胞，不補充雌激素組(Ⅲ組)卻未能檢測到，而移植三個月時，不補充雌激素組(Ⅲ組)的子宮