肝細(xì)胞和枯否細(xì)胞在內(nèi)毒素耐受性形成中作用的實驗研究.pdf

1、本文研究目的：利用三氯化釓封閉枯否細(xì)胞或半乳糖胺抑制肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成，擬探討肝細(xì)胞和枯否細(xì)胞在ETT形成中的作用。 研究方法： 實驗1.雄性昆明小鼠50只，隨機(jī)分為五組，(1)對照組(control)：普通飼養(yǎng)，腹腔注射0.9％NaCl 0.2 ml；(2)肝損傷組(Gain/LPS)：腹腔注射Gain 18 mg/LPS 4μg/只；(3)內(nèi)毒素耐受組(endotoxin tolerance，ETT)：腹腔注射LPS

2、10μg/kg，2小時后腹腔注射Galn/LPS，劑量劑量和處理方法與肝損傷相同；(4)內(nèi)毒素耐受+GdCl<,3>組(GdCl<,3>/ETT)：LPS劑量與ETT組相同，于LPS注射2小時后尾靜脈注射GdCl<,3>(10mg/kg)，間隔24小時腹腔注射Galn/LPS，劑量與ETT組相同；(5)內(nèi)毒素耐受+Gain組(Galn/ETT)：LPS劑量與ETT組相同，2小時后腹腔注射Gain 500mg/kg，間隔12小時腹腔注射G

3、aln/LPS，劑量與ETT組相同。各組動物分別于注射Galn/LPS后1.5h、6h，在戊巴比妥鈉麻醉下經(jīng)內(nèi)疵采血、開腹取肝，用于血漿ALT、肝臟MDA、TNF-α、GSH含量和GSH/GSSG測定；觀察小鼠48小時生存率。 實驗2.動物和分組同實驗1，分別于Galn/LPS注射后0.5h(n=4)、1.5h(n=8)、6h(n=10)，在戊巴比妥鈉麻醉下開腹取肝臟，用Western blotting方法檢測肝臟ERKl/2、

4、p38MAPK、CD14、TLR4、NF-кB p65、NF-кB p50、IкB-α、IRAK-M、HSP70、PPAR-γ、SHIP蛋白的表達(dá)。 研究結(jié)果：ETT可明顯減輕Galn/LPS所致急性肝損傷，經(jīng)LPS預(yù)處理動物血漿ALT活性、肝臟MDA、GSSG含量下降，而GSH含量、GSH/GSSG比值則升高。ETT/GdCl<,3>、ETT/Galn組動物血漿ALT活性、肝臟MDA、GSSG含量明顯高于ETT組，GSH含量、

5、GSH/GSSG比值則低于ETT組。肝勻漿的TNF-α水平測定結(jié)果表明，ETT組TNF-α水平顯著低于肝損傷、ETT/GdCl<,3>和ETT/Galn組(p<0.05)。Gain/LPS可誘導(dǎo)組肝臟ERK1/2、p38MAPK蛋白磷酸化表達(dá)明顯上調(diào)，LPS預(yù)處理可顯著抑制肝臟ERK1/2、p38MAPK蛋白磷酸化水平，NF-кB核轉(zhuǎn)位受抑，而SHIP、IRAK-M、PPAR-γ、HSP70蛋白的表達(dá)則顯著高于Gain/LPS組。ETT

6、/GdCl<,3>、ETT/Gain組因部分抑制ETT的形成，故肝臟ERK1/2、p38MAPK蛋白磷酸化表達(dá)水平雖低于Galn/LPS組，但其表達(dá)仍高于ETT組，而SHIP、IRAK-M、PPAR-γ、HSP70蛋白質(zhì)表達(dá)均低于ETT組(p<0.05)。 研究結(jié)論：LPS預(yù)處理后封閉枯否細(xì)胞的功能，部分阻斷ETT形成，破壞肝臟氧化還原平衡，導(dǎo)致氧化應(yīng)激發(fā)生；LPS預(yù)處理后抑制肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成可能通過抑制肝細(xì)胞表面受體合成或抑制

7、某些可使LPS失活的酶類、急性期反應(yīng)蛋白等的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞對LPS的內(nèi)吞排泄功能障礙，也能部分阻斷ETT的保護(hù)作用。LPS預(yù)處理后封閉枯否細(xì)胞或抑制肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成可能通過改變TLR4介導(dǎo)的LPS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白表達(dá)，上調(diào)TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑膜受體CD14、TLR4，MAPKs表達(dá)和促進(jìn)NF-кB核轉(zhuǎn)位，下調(diào)炎癥反應(yīng)通路中的負(fù)性反饋物：IRAK-M、SHIP、PPAR-γ、HSP70的表達(dá)，產(chǎn)生大量的ROS、TNF-α等